二苯胺试剂:鉴定 D N A。 二苯胺试剂得配制 A 液:1。5 g 二苯胺溶于 1 00 mL 冰醋酸中,再加 1 5 mL 浓硫酸,用棕色瓶保存。如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。 B 液:乙醛得体积分数为 0、2%得溶液. 配制:将 0、1 m L B 液加入到 10 m L A 液中,现配现用. D N A 得粗提取与鉴定 实验原理 1、 D N A 在Na Cl 溶液中得溶解度,就是随着 N a Cl 得浓度得变化而改变得。 当N a C l 得物质得量浓度为0、14 m ol/L 时,DNA 得溶解度最低.利用这一原理,可以使溶解在N a C l 溶液中得DN A 析出。 2、D NA 不溶于酒精溶液,但就是细胞中得某些物质则可以溶于酒精溶液.利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少得 DN A。 3、D N A 遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定 DNA 得试剂。 注意事项 1、步骤 3 析出含 D N A 得黏稠物中,蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入,不能一次快速倒入。 2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌,但就是在不同得步骤中玻璃棒得用法不同。 实验用具 鸡血细胞液(5~1 0 mL);体积分数为 95%得冷酒精,蒸馏水,质量浓度为0、1 g/mL得柠檬酸钠溶液,物质得量浓度分别为 2 mol/L 与0.015 mol/L 得 NaCl 溶液,二苯胺试剂;烧杯(10 0 mL,1 个, 50 m L, 50 0 mL,各 2 个),漏斗,试管(2 0 m L,2个),玻璃棒,滴管,量筒(1 0 0 m L,1 个),纱布,镊子,滤纸,铁架台,铁环,三角架,酒精灯,石棉网,载玻片,试管夹。 实验原理: 1、析出溶解在 NaC 1溶液中得 D N A。 2、用冷酒精提取出含杂质较少得D NA. 3、DNA 在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。 方法步骤: 1.提取细胞核物质:顺时针方向搅拌,稍快,稍重. 5 m in 2.溶解 D N A: 3。析出含 DNA 得黏稠物:蒸馏水300 m L,逆时针方向搅拌,缓慢 4。过滤:取黏稠物 5。再溶解:顺时针方向搅拌,较慢。3 m in 6。过滤:取滤液。 7.提取出含杂质较少得 DNA,逆时针方向搅拌,稍慢.5 min 8.DNA 得鉴定:沸水浴5 min 【实验十二】DNA 得粗提取与鉴定 实验原理 DNA 在氯化钠溶液中得溶解度,就是随着氧化钠得浓度得变化而改变得。当氯化钠得物质得量浓度为 2 mol/L 时,DN A得溶解度最大,浓度为 0.1 4 mol/L 时,D NA 得...