实验八 酵母菌得形态观察及死活细胞鉴别一、实验目得1、观察酵母菌得形态及出芽生殖方式;2、 学习区分酵母菌死活细胞得实验方法;3、掌握酵母子囊孢子得观察方法。二、实验原理1、 酵母菌酵母菌就是不运动得单细胞真核微生物,其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍,不必染色即可用显微镜观察其形态。但由于细胞个体大,采纳涂片得方法制片有可能损伤细胞,一般通过美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖,也可以通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖。本实验通过美蓝染液水浸片法来观察酵母得形态与出芽生殖方式,并对酵母细胞进行死活染色鉴别。2、 美蓝染液美蓝就是一种无毒性得染料,它得氧化型呈蓝色,还原型无色。用美蓝溶液对酵母活细胞染色时,由于细胞得新陈代谢作用,细胞内具有较强得还原能力,能使美蓝由蓝色得氧化型变为无色得还原型,而对代谢作用微弱或死细胞,无此还原能力或还原能力极弱,而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此,不仅用此法可观察酵母细胞形态,也可用来鉴别酵母菌得死细胞与活细胞。三、实验材料1、 菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)培育 1 天得麦芽汁(或豆芽汁)液体培育物。2、 溶液或试剂0、1%吕氏碱性美蓝溶液、5%孔雀绿水溶液、0、5%番红水溶液、95%乙醇,等。3.器材显微镜,擦镜纸,吸水纸,载玻片、盖玻片、酒精灯、接种环、镊子等等。四、实验步骤1、酵母菌出出芽方式得观察及死活鉴定(1)在载玻片中央加一滴 0、1%吕氏碱性美蓝染色液,然后按无菌操作接种蘸取取少量液体酵母放在染液中,混合均匀,染液不宜过多。注:染液不宜过多或过少,否则,在盖上盖玻片时,菌液会溢出或出现大量气泡。 用接种环将菌体与染液混合时,不要剧烈涂抹,以免破坏细胞。(2)用镊子取一块盖玻片,先将一边与菌液接触,然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。 注:盖玻片不宜平放,以免产生气泡。 (3)将制片立即放在显微镜下镜检,先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母得形态与出芽情况,并根据颜色来区别死活细胞。 (4)将制片放置约 5min 后镜检,注意死细胞数量就是否增加。(5)染色约 30min 后再次观察,注意死细胞数量就是否增加。2、酵母菌子囊孢子得观察(1)涂片 在载玻片中央加一滴蒸馏水,然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌放在染液中,混合均匀,染液不宜过多。(2)干燥固定 用夹子夹住载玻片,在酒精灯上方来回移动,注意不要将载玻片距离火焰太近,以免烫死酵母菌。(3)染色 用 5%孔雀绿水溶液覆盖 1...
