Orexin双受体拮抗剂Suvorexant对APPPS1小鼠昼夜节律紊乱及认知行为损伤的改善作用及机制研究

Orexin 双受体拮抗剂 Suvorexant 对 APP/PS1 小鼠昼夜节律紊乱及认知行为损伤的改善作用及机制讨论目的:观察 orexin 双受体拮抗剂 suvorexant 慢性预处理能否有效改善 9 月龄 APP/PS1 双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠的行为昼夜节律紊乱和多种认知功能损伤,并探讨其在 AD 病程中发挥神经保护作用的可能机制。方法:1.动物分组及给药将 8 月龄雄性 APP/PS1 和相同遗传背景的野生型(wild type,WT)对比 C57BL/6 小鼠随机分为 4组:APP/PS1-Vehicle(APP/PS1-Veh)、APP/PS1-Suvorexant(APP/PS1-Suv)、WT-Vehicle(WT-Veh)和 WT-Suvorexant(WT-Suv),每组 15-20 只。每日在光照期开始(ZT0)时,通过口服灌胃给予 suvorexant(30 mg/kg)或等体积的 vehicle(0.5%甲基纤维素 400),连续给药 28 d。2.跑轮行为学实验首先设置实验条件为 12 h 光照:12 h 黑暗(light-dark,LD)环境,即 6:00 开灯,18:00关灯,开灯期间光照强度为 360 Lx。所有小鼠先适应 1 周,然后在 LD 环境中连续记录 28 d,之后转入持续黑暗(constant dark,DD)环境,再继续记录 14 d。跑轮实验结束后,对小鼠的活动量进行统计分析,并使用 Actiview 和 Clocklab 分析软件根据跑轮原始数据对 LD和 DD 环境下小鼠的周期(period)、活动持续时间(activity duration)、鲁棒值(robustness)、振幅(amplitude)及昼夜变异性(intradaily variability,IV)进行分析,以衡量其运动的昼夜节律性及稳定性。3.认知行为学实验(1)Y 迷宫自发交替实验:将小鼠置于 Y 迷宫中心区域,并使其自由探究迷宫 8 min,记录各组小鼠的进臂总次数及进臂顺序,计算自发交替正确率。(2)Morris 水迷宫实验:包括定位航行实验、空间探究实验和可视平台实验,在 Y 迷宫实验结束后第二天开始。第 1-5 天为定位航行实验,记录各组小鼠寻找水下平台的躲避埋伏期和游泳轨迹;第 6 天在空间探究实验中记录小鼠在目标象限的游泳时间和轨迹,并计算其在目标象限的游泳时间百分比;随后进行可视平台实验记录小鼠到达可视平台的时间,此外还记录小鼠在 6 天实验中的游泳速度。4.在体海马 LTP 记录行为学实验结束后,小鼠用 5%水合氯醛(0.007 ml/g)腹腔注射麻醉并固定于脑立体定位仪,根据脑立体定位图谱将绑定的刺激和记录电极插入小鼠海马 Schaffer 侧枝-CA1 区突触传递通路。在测试刺激下记录场兴奋性突触后电位(field excitatory postsynaptic potenti...