MLL重排白血病人源化小鼠模型的建立及系别转换的研究

MLL 重排白血病人源化小鼠模型的建立及系别转换的讨论背景及目的:MLL 基因重排是儿童和成人白血病中常见的遗传学异常,MLL 重排白血病具有独特的生物学和临床特征,已成为急性白血病的一种独立亚型。然而,目前我们对 MLL-r 白血病的病因、发病机制及其系别转换的原因等问题尚不十分明确。本讨论以 MLL-r 急性白血病中常见的 MLL-AF9 融合基因为讨论对象,通过逆转录病毒感染人胚胎肝脏造血干细胞或成人骨髓造血干细胞,并移植入免疫缺陷小鼠,建立 MLL-AF9 白血病人源化小鼠模型;同时利用该模型探讨微环境(细胞因子)和靶细胞(胚胎造血干细胞、成人骨髓造血干细胞)对 MLL-r 白血病系别决定、转换的影响。方法:1.通过 MLL-AF9 逆转录病毒感染不同来源(人胚胎和健康成人骨髓)的 CD34+造血干细胞,并植入 NSG 或 NSG/SGM3 免疫缺陷小鼠,建立 MLL-AF9 白血病人源化小鼠模型。2.通过细胞形态学和流式细胞术等多种方法明确上述人源化小鼠模型中MLL-AF9 白血病的类型,比较不同来源的造血干细胞和微环境对 MLL-AF9 白血病系别决定的影响。3.通过高压静脉注射 IL-3 质粒诱导 NSG 小鼠表达人 IL-3,并将原代 MLL-AF9 白血病细胞在上述 NSG 小鼠中传代,探讨人 IL-3 对 MLL-AF9 白血病发生、系别决定、转换的影响。4.通过 Southern 印迹杂交和 IGH 基因重排等方法,对上述 MLL-AF9 白血病进行克隆性分析。结果:1.MLL-AF9 逆转录病毒感染人胚胎肝脏 CD34+造血干细胞可在 NSG 小鼠诱发 ALL 通过 MLL-AF9 逆转录病毒感染人胚胎肝脏 CD34+造血干细胞(以下简称 MLL-AF9 h FLCs),并经尾静脉注射经亚致死剂量照射的 NSG 免疫缺陷小鼠(以下简称 MLL-AF9 h FLCs-NSG),定期检测 NSG 小鼠一般情况及外周血白血病细胞比例。MLL-AF9 h FLCs-NSG 小鼠移植后中位生存时间为 183.0(179.0-192.0)天,肝脏、脾脏明显增大,于外周血、骨髓、肝脏和脾脏等外周器官检测到大量GFP+白血病细胞,此类细胞形态及免疫表型与人 MLL-r 急性 B 淋巴细胞白血病高度类似,提示 MLL-AF9 h FLCs 可在 NSG 小鼠诱发 ALL(以下简称 MLL-AF9h FLCs-NSG ALL)。将上述 MLL-AF9 h FLCs-NSG 小鼠的骨髓中的 ALL 细胞在 NSG 小鼠中传代,结果显示大于等于 5×102 的细胞即可在第二代 NSG 小鼠中诱发 ALL,且白血病细胞形态、免疫表型均与原代 MLL-AF9 h FLCs-NSG ALL 一致。2.MLL-AF9 h FLCs 可在 NSG/SGM3 小...