电转酿酒酵母实验步骤（以含有单杂载体 pAbAi 整合后的 Y1H 菌株为例）1 ） 将 转 化 用 酵 母 菌 株 的 单 菌 落 接 种 于 100mlSD/-Ura 培 育 基 中 ， 30℃ 过 夜 培 育 至OD600=1.3，时间大概 23h;3）酵母菌液置于冰上 10min，然后于 44000g(1500r/min)℃离心收获培育细胞，将两管细胞置于一管，加入 50ml 冰冷的灭菌水重悬洗涤，重复两次。6）在离心后的酵母细胞中加入 10ml 冰冷的 1mol/L 山梨醇，离心。然后加入 0.5ml 冰冷的1mol/L 山梨醇重悬。7）电转化：在无菌冰冷的微量离心管中加入 40ul 酵母菌细胞和小于等于 100ng 待转化的 DNA（体积小于 5ul），混匀。转移至冰冷的电转槽中，置于冰上 5min，然后进行电击，1.5KV 档，电击时间在 5.0-5.4ms。8）立即往电击槽中加入 500ul 冰冷的 1mol/L 山梨醇，轻轻吹吸混匀，吸入收集管中。在收集管中加入适量液体筛选培育基，30℃摇床 150RPM 孵育 1-2h。9）直接涂布在选择培育基平板上，于 30℃培育 3-6 天，直到平板上出现菌落。注意：转 AD 的菌液分别涂于有抗生素和无抗生素的两个板子上，用以推断是否转化成功。计算滴度涂于无抗生素板子上，参考浓度 10ul 稀释至 100ul 或直接涂 100ul。
