CCK8检测细胞增殖毒性的原理及注意事项

CCK8 检测细胞增殖/毒性的原理、方法及注意事项一、CCK8 检测细胞增殖/毒性的原理Cell Counting Kit-8（简称 CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有 WST—8【化学名:2-（2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-（4-硝基苯基）-5-(2,4-二磺酸苯)—2H-四唑单钠盐】，它在电子载体 1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验CCK8 的优点：使用方便,省去了洗涤细胞,不需要放射性同位素和有机溶剂；CCK-8 法能快速检测;CCK—8 法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；CCK—8 法的重复性优于 MTT 法;CCK-8 法对细胞毒性小;CCK—8 细胞活性检测试剂中为 1 瓶溶液，毋需预制，即开即用。CCK8 的缺点：与 MTT 法相 比，CCK8 和 XTT 的价格比较贵。CCK8 试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培育基颜色接近，不注意的话容易产生漏加或多加。与以往的增殖/毒性测定试剂相比较：检测方法MTT 法XTT 法WST—1 法 CCK8 法甲臢产物的水 差 （ 需 加 好好好溶性有 机 溶 剂溶解）产品性状粉末2 瓶溶液溶液1 瓶溶液使用方法配 成 溶 液后使用现配现用即开即用即开即用检测灵敏度高很高很高高检测时间较长较短较短最短检测波长560-600nm 420-480nm 420-480nm 430—490nm细胞毒性高 ， 细 胞形 态 完 全消逝很 低 ， 细胞 形 态 不变很低,细胞形态不变很 低 ， 细胞 形 态 不变试剂稳定性一般较差一般很好批量样品检测 可以非常适合非常适合非常适合便捷程度一般便捷便捷非常便捷二、CCK8 检测细胞增殖/毒性的方法实验一:细胞增殖分析1、制备细胞悬液:细胞计数2、接种到 96 孔板中:根据合适的铺板细胞数，每孔约 100ul 细胞悬液，同样的样本可做 3 个重复。3、37℃培育箱中培育：细胞接种后贴壁大约需要培育 2—4 小时,假如不需要贴壁，这步可以省去。4、加入 10ul CCK8:由于每孔加入 CCK8 量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培育板以帮助混匀。或者直接配置含 10％CCK8 的培育基，以换液的形式加入。5、培育 1-4 小时:细胞种类不同，形成的 Formazan ...