免疫组库项目计划书一项目背景免疫系统拥有 6 个主要类型的蛋白，分为免疫球蛋白的轻链和重链、TCRα，TCRβ，TCRγ 和TCRδ，每一种免疫蛋白拥有彼此间细微差异的数量巨大的亚型。对于某一种特定的感染或疾病，免疫系统中的 B 细胞和 T 细胞会作出特异性的免疫反应，产生对抗抗原的特异性BCR 和 TCR 序列。记忆性的免疫细胞会长期存在免疫系统中以便当抗原再次入侵时能快速做出反应。这样人们可以寻找不同病毒、细菌或真菌引起免疫反应的特定的 BCR/TCR 基因序列.免疫组库（Immune Repertoire,IR）是指在任何指定时间，某个个体的循环系统中所有功能多样性 B 细胞和 T 细胞的总和。它反映机体免疫系统在特定时间内应对外界刺激应答的能力,可以准确而全面地反映机体免疫系统的健康状况。免疫组库测序是以 T/B 淋巴细胞为讨论目标,多重 PCR（或 5’RACE）结合高通量测序为技术手段,全面评估免疫系统的多样性，识别并量化体内免疫应答增殖克隆，在抗体发掘、疫苗设计、认识免疫系统发育、感染性疾病治疗、自身免疫系统疾病治疗以及癌症的免疫治疗等领域有着潜在的应用价值。二市场调查免疫组库测序技术现在已经成熟，市场也较大，目前市场上有许多公司开展，比如：华大基因,北京迈诺基因，上海伯豪生物,北京百迈客生物，上海晶能生物，苏州泓迅生物等.三技术路线免疫组库测序的技术已经成熟,有许多商业化试剂盒，数据分析也已经流程化。1.总技术路线 收集样本 磁珠法分离 T 细胞和 B 细胞提取 mRNA多重 PCR 扩增构建文库高通量测序生物信息分析2.项目实施细节目前 clontech 公司有商业化的免疫组库文库构建试剂盒 SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit ，考虑到前期的技术风险,推举购买此商业试剂盒减少技术磨合的时间。测序 TCR CDR3 推举 PE101，BCR CDR3 推举 PE1513.项目周期从收到标本到给出实验报告，目前市场上的公司都是 30 天收集样本,质控 3 天文库构建 10 天上机测序 5 天数据分析 12 天四项目用仪器实验仪器主要用途制冰机制冰电冰箱试剂的储存高速台式离心机试剂的离心Mini 式离心机瞬离试剂旋涡式混合振荡器混匀试剂电子分析天平试剂的称量核酸检测仪核酸纯度和浓度的检测PCR 仪PCR电泳仪和水平电泳槽琼脂糖凝胶电泳凝胶成像仪核酸琼脂糖凝胶电泳的检测和分析蒸汽式高压湿热消毒器试剂、实验耗材及用具的消毒电热鼓风干燥箱实验用品的干燥恒温水浴锅提供恒温环境电脑用于数据分析第二代测序仪测序五项目的风险目前国内要开通医学高通测序检测，需要国家认证的 CFDA 证书,实验室需要符合 CLIA 认证。
