第2课时实验操作及实验结果[学习目标]1.学会培养基的制备方法。2.掌握大肠杆菌的纯化方法。3.了解菌种保藏所用的方法。知识点一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基知识梳理1.操作步骤2．倒平板(1)在火焰旁右手拿锥形瓶，左手□拔出棉塞。(2)右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过□火焰。(3)左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基(约10～20mL)倒入培养皿，左手立刻盖上□皿盖。(4)待平板冷却凝固后，将平板□倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上。1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2．为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。典题分析题型一培养基的制备过程分析[例1]下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是()A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50℃左右时倒平板D．待平板冷却凝固后将平板倒过来放置解题分析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，其顺序不能颠倒，A错误；牛肉膏比较黏稠，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯中加热，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸，B正确；待培养基冷却至50℃左右，开始倒平板，C正确；平板冷却凝固后倒置，D正确。答案A知识拓展1培养基灭菌后，需冷却至50℃左右时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。2整个操作在酒精灯火焰旁进行，避免周围环境中微生物的污染。3平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。4倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。知识点二纯化大肠杆菌知识梳理1.菌落的概念由一个微生物细胞繁殖而来的肉眼可见的□子细胞群体，就是菌落。2．纯化大肠杆菌的原理在培养基上得到由□一个细胞繁殖而来的肉眼可见的□菌落，即获得较纯的菌种。3．微生物接种常用的方法(1)平板划线法①概念：通过接种环在琼脂固体培养基表面□连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。②操作步骤③注意事项a．第一次划线及每次划线之前都需□灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环。第一次划线前灼烧：杀死接种环上□原有的微生物。每次划线之前灼烧的目的：杀死□上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。划线结束灼烧的目的：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染□环境和感染□操作者。b．灼烧接种环之后，要等其□冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。c．在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的□末端开始划线，这样才能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。d．划线时最后一区域不要与□第一区域相连。e．划线用力要大小适当，防止用力过大将□培养基划破。(2)稀释涂布平板法①概念：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到□琼脂固体培养基的表面，进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的□菌落。②操作过程包括□系列稀释和□涂布平板。③操作步骤A．系列稀释操作步骤：a．将分别盛有9mL水的6支试管灭菌，并按101～106的顺序编号。b．用移液管吸取1mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使□菌液与水充分混匀。c．从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复第2步的混匀操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。注意：移液管需要经过□灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2cm处。B．涂布平板操作步骤：a．涂布器消毒：将□涂布器浸在盛有□酒精的烧杯中消毒。b．取菌液：取少量菌液(不超过0.1mL)，滴加到培养基表面。c．涂布器灭菌：将沾有少量酒精的涂布器在□火焰上引燃，待酒精燃尽后，...
