无菌操作根本技术无菌操作技术不仅在微生物学研究和应用上起着举足轻重的作用，在许多生物技术中也被广泛应用，例如转基因技术、单克隆抗体技术等。无菌室，微生物实验室内专辟的一个小房间，室外设一个缓冲间，缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭，无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢、便于清洗，室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。工作台的台面应该处于水平状态，无菌室和缓冲间都装有紫外线灯〔距离工作台面1米〕，工作人员进入无菌室应穿戴灭过菌的服装、帽子。超净台，主要功能是利用空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的各种微小尘埃，通过电动装置使空气通过高效过滤器具后进入工作台面，使台面始终保持在流动无菌空气控制之下。在条件较困难的地方，也可以用木制无菌箱代替超净台〔正面开有两个洞，不操作时用推拉式小门挡住，操作时可以将双臂伸进去；正面上部装有玻璃，便于在内部操作，箱内部装有紫外线灯，从侧面小门可以放进去器具和菌种、细胞株等〕。微生物的培养在微生物的培养过程中，要保持培养物纯洁性；培养微生物的要领，是为所需要的微生物提供良好的生存环境，同时阻止或抑制其他微生物的生长。〔一〕培养基1.认识培养基的根本组成成分，从生物体构成的根本元素这一角度理解培养基中为什么都需要具备这些根本成分。2.培养基的用途和种类：液体和固体两大类。3.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方；尽管培养基的配方各不相同，但是其根本成分都包括水、碳源、氮源和无机盐。4.培养基是否合格〔无菌试验〕：培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长〔液体不变浑浊〕，说明培养基的制备是成功的，否那么需要重新制备。〔二〕无菌技术1.无菌技术的概念：无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。日常的生活环境中，每时每刻每处都存在着微生物，任何一个不经意的动作都可能将某种微生物引入到培养物中。在具备无菌环境和获得无菌材料后，还要始终保持无菌状态，才能对某种特定的微生物进行研究或利用它们的功能，否那么外界的各种微生物很容易混入。外界不相干的微生物混入的现象，在微生物学叫做污染杂菌。防止污染是微生物学工作中十分关键的技术：彻底灭菌和防止污染是无菌技术的两个方面。此外，要有效防止操作者自身被微生物感染，还要防止所研究的微生物，特别是致病微生物或经过基因工程改造了的本来自然界不存在的微生物从我们的实验容器中逃逸到外界环境中去〔生物平安〕。无菌操作非常重要，无论是倒平板、平板划线操作，还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌〞，只有熟练、标准地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。2.消毒与灭菌的概念：〔1〕培养细菌用的培养基与培养皿〔需要灭菌〕〔2〕玻棒、试管、烧瓶和吸管〔需要灭菌〕〔3〕实验操作者的双手〔需要消毒〕〔4〕接种环、针、涂布棒：灼烧灭菌〔外焰〕。3.倒平板：〔1〕灭菌后，培养基冷却到55℃后应及时进行倒平板操作，如果不能及时操作，需要将培养基放到55℃左右的电热箱中保温，以防止琼脂凝固〔用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了〕；每个72mm培养皿需要培养基12~15ml。〔2〕为什么要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。〔3〕平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基外表的湿度也比拟高，将平板倒置，既可以使培养基外表的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。〔4〕在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。4.平板划线〔1〕为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀...
