常用细菌鉴定技术实验目的•掌握细菌的基本鉴定技术细菌的基本鉴定技术•生化反应鉴定：通过观察细菌利用酶和降解糖类、醇类、脂类、蛋白质和氨基酸的能力可以了解其生化活性，从而识别和鉴定细菌。•免疫学鉴定（血清学鉴定）•编码鉴定实验内容—生化反应鉴定（每2人一组）：•1、糖（苷、醇）利用试验：乳糖分解利用试验•2、氧化酶试验•3、过氧化氢酶试验•4、克氏双糖铁（KIA）•5、半固体（M）（这个实验已做过，本次不做）•6、吲哚试验（I）•7、尿酶试验（U）一、糖（苷、醇）利用试验：乳糖分解利用试验•【原理】不同的细菌对不同的糖（苷、醇）的分解能力不同，有的分解，有的不能分解，有的分解后能产酸产气，有的分解后仅能产酸，因此可以用来鉴别细菌。以乳糖分解利用为例，乳糖发酵管中含溴甲酚紫指示剂，当细菌分解乳糖产酸，培养基pH下降，指示剂变黄色，不分解乳糖的指示剂不变色。乳糖分解利用试验•菌种：大肠杆菌、变形杆菌•培养基：乳糖发酵管•方法：•1、取2支乳糖发酵管，用记号笔分别标记大肠杆菌和变形杆菌。•2、按细菌的液体接种法，将大肠杆菌和变形杆菌分别接种到乳糖发酵管中，放入培养箱中培养18~24h。乳糖分解利用试验•结果观察乳糖发酵管中含溴甲酚紫指示剂，当pH值>6.8时呈紫色，pH值<5.2时呈黄色，当细菌分解利用乳糖，产酸，使培养基的pH值变小，呈黄色。如细菌不能分解乳糖，则乳糖发酵管仍为紫色。接种大肠杆菌的乳糖发酵管变为黄色，接种变形杆菌的乳糖发酵管仍是紫色。说明大肠杆菌能够分解乳糖，变形杆菌不能分解乳糖。乳糖发酵管中如果有小导管，还可以观察产气情况。大肠杆菌能够分解利用乳糖，产酸，产气，小导管中有气泡产生。氧化酶试验•【原理】氧化酶又称细胞色素氧化酶，能将还原型细胞色素C氧化形成水和氧化型细胞色素C，氧化型细胞色素C再使四甲基对苯二胺氧化，形成显色反应。氧化酶试验•【试剂与器材】•1．菌种大肠埃希菌、铜绿假单胞菌•2．试剂氧化酶试剂（1%四甲基对苯二胺）•3．器材2cm×2cm滤纸片、污物缸氧化酶试验•【操作步骤】•1．将滤纸片叠成四方块状。•2．用滤纸片的中心尖角小心刮取大肠埃希菌菌落，注意不可碰到培养基。•3．轻轻展开滤纸片，刮取的菌落正好在滤纸片中心，滴加一滴1%四甲基对苯二胺。•4．立刻观察菌落颜色的变化。•5．同法做铜绿假单胞菌的氧化酶试验。氧化酶试验•【结果】滴加氧化酶试剂后铜绿假单胞菌立刻变为紫色，为氧化酶阳性。大肠埃希菌不变色，为氧化酶阴性。氧化酶试验（左侧为铜绿假单胞菌、右侧为大肠埃希菌）氧化酶试验•【注意事项】•1．实验中的菌种要求新培养的，不宜用陈旧的培养物。•2．刮取细菌时不可碰到培养基，不可用接种环等金属物品取菌。•3．氧化酶试剂要新鲜配制，一般装在棕色瓶中，放在冰箱中可保存一周，时间长了易被空气氧化变色。•4．结果要立刻观察，1min内变色者为阳性，超过1min变色的为阴性。•5．在滤纸片上滴加试剂时不要过多，以刚润湿纸片为宜，如滤纸片过湿，可能妨碍空气与细菌接触，延长反应时间，造成假阴性。过氧化氢酶试验•【原理】过氧化氢酶试验又称触酶试验。部分细菌含有黄素蛋白，在代谢过程中与空气中的氧发生反应，形成过氧化氢，过氧化氢对细菌有毒害作用，会破坏细胞组分，因此，细菌为保护自己，通常具有过氧化氢酶，可以催化裂解过氧化氢，形成水和氧气。过氧化氢酶试验•【试剂与器材】•1、菌种金黄色葡萄球菌•2、试剂3%过氧化氢•3、器材载玻片、无菌移液器吸头、酒精灯、火柴、超净工作台过氧化氢酶试验•【操作步骤】•1、在载玻片中央滴加一滴3%过氧化氢。•2、用无菌移液器吸头蘸取少量细菌，在3%过氧化氢中混匀。•【结果】观察气泡的产生情况。可以看见在吸头上金黄色葡萄球菌菌苔周围，产生大量气泡，为过氧化氢酶阳性。如果菌苔周围无气泡产生，为过氧化氢酶阴性。过氧化氢酶试验•【注意事项】•1、普通金属接种环可能与过氧化氢反应，形成气泡，造成假阳性，因此必须使用铂丝接种环或塑料、玻璃材质的工具。•2、从血液琼脂平板上挑取菌落时千万小心，不要碰到培养基，因红细胞中有过氧化氢酶，即...
