凯基BCA蛋白含量检测试剂盒CatNumber：KGPBCAForResearchUseOnlyStoreat-20℃foroneyearExpiredate：一、试剂盒说明BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCAProteinAssayKit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。检测浓度下限达到25微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1～20微升。二、试剂盒组份组份Cat:KGPBCA试（100assay酶标板/20assay1mL比色杯）Cat:KGPBCA（250assay酶标板/50assay1mL比色杯）蛋白标准溶液（0.5μg/μL）2mL5mLBCA试剂A20mL25mL×2BCA试剂B0.4mL1mL三、操作步骤A．酶标板操作1.标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂孔号01234567蛋白标准溶液（μL）01248121620去离子水（μL）2019181612840对应蛋白含量（μg）00.51.02.04.06.08.010.02.根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀；3.各孔加入200μLBCA工作液；4.把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；5.稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值；,6.根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（20μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/μL）。B．分光光度计测定1.标准曲线的绘制：各管按照下表加入试剂孔号01234567蛋白标准溶液（μL）051020406080100去离子水（μL）1009590806040200对应蛋白含量（μg）02.55.010.020.030.040.050.02.根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀；3.各管加入1000μLBCA工作液；4.各管充分混匀，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；5.稀释待测样品至合适浓度，样品稀释液总体积为100μL，加入BCA工作液1000μL，充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值；6.根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（100μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/μL）。四、注意事项1.配制好的混合BCA工作液室温24小时内稳定。2.加入BCA工作液后，也可以在室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间。3.待测样品浓度在50～2000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。4.BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的TritonX-100，5%的Tween20,60,80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于1mM.不适用BCA法时建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。5.操作时要带手套。
