实验5：肝中酮体的生成(1071)VIP免费

实验五肝中酮体生成【目的】验证肝的生酮能力（生成酮体是肝特有的能力）【复习】酮体是脂酸在肝分解氧化时特有的中间代谢产物。是乙酰乙酸、-羟丁酸和丙酮三者的统称。1.酮体的生成•部位：肝线粒体•原料：乙酰CoA，主要来自脂酸的-氧化。•关键酶：HMGCoA合成酶2.酮体的利用特点•肝内生成，肝外利用（肝中缺乏利用酮体的酶）3.酮体生成的生理意义•酮体是肝脏输出能源物质的一种形式。在长期饥饿时，是脑和肌肉的主要能源物质。紫红色化合物【原理】丁酸酮体肝匀浆观察显色粉发生的颜色变化，判定在酶的作用下是否有酮体的生成。显色粉β-羟丁酸乙酰乙酸丙酮肌匀浆√×【原理】肝细胞中有生成酮体的酶，能以乙酰CoA为原料合成酮体。本实验以丁酸作为底物，与新鲜肝匀浆一起放入与体内相似的环境中，也可以生成酮体。判断酮体生成与否，可将反应液与显色粉混合，酮体能与显色粉中的亚硝基铁氰化钠反应，生成紫红色化合物。而将丁酸与肌匀浆混合，放在同样的环境中则不能生成酮体，因此也不与显色粉反应。【实践操作】取3支小试管，在上端标注学号、管号，如下操作加入物（滴）123洛克液1515150.5mol/L丁酸溶液30—30Ph7.6磷酸缓冲液151515肝匀浆2020—肌匀浆——20蒸馏水—30—0.02%甲烯蓝溶液101010将各管混匀后置３７度水浴40分钟。15%三氯乙酸溶液202020混匀后离心5分钟，用滴管取各管上清液置反应板中。显色粉一小匙（克）0.20.20.2结果（颜色反应）结果分析肝脏中酶的催化下以丁酸为底物生成酮体，使显色粉变为紫红色。肌肉中的酶不能催化丁酸生成酮体，显色粉无反应。紫红色淡紫红色白色肝脏中酶的催化下以肝中残余乙酰CoA为底物生成少量酮体，使显色粉变为淡紫红色。【注意事项】1.凹玻板4人用1个。2.吸取上清液的毛滴管，管对管吸取液体，不能混用，4人1套。3.混匀后吸取肝匀浆和肌匀浆。4.取显色粉后立即盖瓶盖，取量以覆盖半凹槽为准。5.蒸馏水取用四人一小管，每管接水到1/3处。【思考题】洛克液、15%三氯乙酸溶液在实验中各有什么作用？洛克液起到营养的作用；15%三氯乙酸溶液可以终止反应的发生。【测试】1.请写出酮体由哪些成分组成？酮体包括乙酰乙酸、-羟丁酸和丙酮。2.酮体的利用特点？肝内生成，肝外利用。3.酮体生成的生理意义？酮体是肝脏输出能源物质的一种形式。在长期饥饿时，是脑和肌肉的主要能源物质。