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实验5:肝中酮体的生成(1071)VIP免费

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实验五肝中酮体生成【目的】验证肝的生酮能力(生成酮体是肝特有的能力)【复习】酮体是脂酸在肝分解氧化时特有的中间代谢产物。是乙酰乙酸、-羟丁酸和丙酮三者的统称。1.酮体的生成•部位:肝线粒体•原料:乙酰CoA,主要来自脂酸的-氧化。•关键酶:HMGCoA合成酶2.酮体的利用特点•肝内生成,肝外利用(肝中缺乏利用酮体的酶)3.酮体生成的生理意义•酮体是肝脏输出能源物质的一种形式。在长期饥饿时,是脑和肌肉的主要能源物质。紫红色化合物【原理】丁酸酮体肝匀浆观察显色粉发生的颜色变化,判定在酶的作用下是否有酮体的生成。显色粉β-羟丁酸乙酰乙酸丙酮肌匀浆√×【原理】肝细胞中有生成酮体的酶,能以乙酰CoA为原料合成酮体。本实验以丁酸作为底物,与新鲜肝匀浆一起放入与体内相似的环境中,也可以生成酮体。判断酮体生成与否,可将反应液与显色粉混合,酮体能与显色粉中的亚硝基铁氰化钠反应,生成紫红色化合物。而将丁酸与肌匀浆混合,放在同样的环境中则不能生成酮体,因此也不与显色粉反应。【实践操作】取3支小试管,在上端标注学号、管号,如下操作加入物(滴)123洛克液1515150.5mol/L丁酸溶液30—30Ph7.6磷酸缓冲液151515肝匀浆2020—肌匀浆——20蒸馏水—30—0.02%甲烯蓝溶液101010将各管混匀后置37度水浴40分钟。15%三氯乙酸溶液202020混匀后离心5分钟,用滴管取各管上清液置反应板中。显色粉一小匙(克)0.20.20.2结果(颜色反应)结果分析肝脏中酶的催化下以丁酸为底物生成酮体,使显色粉变为紫红色。肌肉中的酶不能催化丁酸生成酮体,显色粉无反应。紫红色淡紫红色白色肝脏中酶的催化下以肝中残余乙酰CoA为底物生成少量酮体,使显色粉变为淡紫红色。【注意事项】1.凹玻板4人用1个。2.吸取上清液的毛滴管,管对管吸取液体,不能混用,4人1套。3.混匀后吸取肝匀浆和肌匀浆。4.取显色粉后立即盖瓶盖,取量以覆盖半凹槽为准。5.蒸馏水取用四人一小管,每管接水到1/3处。【思考题】洛克液、15%三氯乙酸溶液在实验中各有什么作用?洛克液起到营养的作用;15%三氯乙酸溶液可以终止反应的发生。【测试】1.请写出酮体由哪些成分组成?酮体包括乙酰乙酸、-羟丁酸和丙酮。2.酮体的利用特点?肝内生成,肝外利用。3.酮体生成的生理意义?酮体是肝脏输出能源物质的一种形式。在长期饥饿时,是脑和肌肉的主要能源物质。

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