人绒促性素单克隆抗体的制备与分离纯化VIP专享VIP免费

性分析实验表明,Citrostatin同时具有杀伤肿瘤细胞的功能,证明了Citrostatin同时具有抑制肿瘤新生血管的形成和直接杀伤肿瘤的双重活性。但与等摩尔浓度的T8、citropin1.18比较,在细胞和血管水平,抑制效果无明显差异,与化学合成的Citrostatin相比,抗肿瘤活性也无明显差别[5]。Citrostatin具有位于C端的citropin1.18序列,其带正电荷的极性氨基酸可与肿瘤细胞膜表层带负电荷的磷脂产生静电引力作用,使Citrostatin聚集于肿瘤细胞附近,而新生肿瘤组织的血管丰富,内皮细胞数量较多,Citrostatin的浓度增加可增强对内皮细胞的抑制作用。尽管细胞和血管水平只反映了Citro2statin具有双功能的抗肿瘤活性,但真正有意义的工作须在活体水平证明Citrostatin与单独使用cit2ropin1.18、T8相比,具有明显抑制肿瘤生长的优势,或者通过酰胺化增加Citrostatin的活性,达到更好的抑制肿瘤生长的目的,这有待下一步的研究证实。参考文献:[1]O′ReillyMS,BoehmT,ShingY,etal.Endostatin:anendogenousin2hibitorofangiogenesisandtumorgrowth[J].Cell,1997,88:2772285.[2]DoyleJ,BrinkworthCS,WegenerKL,etal.nNOSinhibition,antimi2crobialandanticanceractivityoftheamphibianskinpeptide,citropin1.1andsyntheticmodification[J].EurJBiochem,2003,270:114121153.[3]WegenerKL,WabnitzPA,CarverJA,etal.HostdefencepeptidesfromtheskinglandsoftheAustralianbluemountainstree2frogLitoriacitropa.Solutionstructureoftheantibacterialpeptidecitripin1.1[J].EurJBiochem,1999,265:6272637.[4]MaeshimaY,SudhakarA,LivelyJC,etal.Tumstatin,anendothelialcell2Specificinhibitorofproteinsynthesis[J].Science,2002,295:1402143.[5]马丽,杨生生,杨志峰,等.Citrostatin的构建与活性分析[J].第二军医大学学报,2006(11):124921253.人绒促性素单克隆抗体的制备与分离纯化沈泓1,易喻1,梅建凤1,朱克寅2,李敏1,应国清1(1.浙江工业大学药学院,浙江杭州310014;2.杭州博林生物技术有限公司,浙江杭州310018)摘要:目的制备人绒促性素(hCG)单克隆抗体。方法hCG抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按5∶1融合,间接ELISA法筛选阳性孔,有限稀释法进行克隆化培养;制备腹水抗体;间接ELISA法测定抗体效价;采用HiTraprProteinAFF亲和色谱柱纯化抗体。结果得到2株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,细胞培养上清中抗体效价达10-3以上,腹水抗体效价达10-7以上,纯化后的单抗纯度达98%以上,回收率达75%。结论成功获得两株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,可用于早孕、肿瘤等诊断的研究。关键词:人绒促性素;单克隆抗体;杂交瘤细胞中图分类号:Q57;Q813文献标识码:A文章编号:100521678(2010)0120022204PreparationandpurificationofmonoclonalantibodiesagainsthumanchorionicgonadotrophinSHENHong1,YIYu1,MEIJian2feng1,ZHUKe2yin2,LIMin1,YINGGuo2qing1(1.SchoolofPharmaceuticalScience,ZhejiangUniversityofTechnology,Hangzhou310014,China;2.BIOLINKBiopharm,Co.,Ltd.,Hangzhou310018,China)收稿日期:2009209208基金项目:浙江省科技厅项目(2009c33089)作者简介:沈泓(19832),女,浙江杭州人,硕士研究生,研究方向为单克隆抗体的制备、分离纯化和应用研究;应国清,通信作者,bio2ph@zjut.edu.cn。22中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2010年第31卷第1期Abstract:PurposeTopreparemonoclonalantibodyagainsthCG.MethodsBalb/cmicewereimmunizedwithhCG,andspleencellsfromthemicewerefusedwithmyelomacellsSP2/0atratioof5∶1.Positivecloneswerescreenedbyindirectenzyme2linked2immunoadsorbentassay(ELISA),thentheclonesweresubclonedbylimitingdilutionandamplifiedfurther.Afterintraperitonealinjectionofhybridomacells,mouseascitesantibodywasprepared.TitresandspecificityoftheascitesantibodywereidentifiedanddeterminedbyindirectELISA.TheasciteswerepurifiedbyproteinAaffinitychromatography.ResultsTwostrainsofhybridomacelllinesob2tainedcouldsecreteMAbstably.Thetit...