课题3分解纤维素的微生物的分离新课导入纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，植物每年产生的纤维素超过70亿吨；分布在植物的根、茎、叶等器官中。为什么地球上每年产生这么多的纤维素，我们还没有被纤维素淹没？在枯树或草炭土中有许多能利用和分解纤维素来作为能源的微生物，今天我们就来观察土壤中能水解纤维素的微生物。基础知识棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物，纤维素的分解需要在纤维素酶的催化作用下完成，过程如下：（一）纤维素与纤维素酶纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维素纤维二糖葡萄糖C1酶Cx酶葡萄糖苷酶纤维素酶活性的测定实验：图2-12纤维素水解滤纸试验，右边的试管中加入了纤维素酶，而左边的没有加入（二）纤维素分解菌的筛选1、筛选纤维素分解菌的方法是______________。该方法可以通过________反应直接筛选。刚果红染色法颜色2、其原理是：刚果红可以与纤维素这样的多糖形成____________，当纤维素被_________分解后，红色复合物无法形成，出现以_____________为中心的________，我们可以通过_______________来筛选纤维素分解菌。红色复合物纤维素酶纤维素分解菌透明圈是否产生透明圈图2-13四种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈练一练：1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是（）A.纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种B.纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖C.纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁D.葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖2.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是（）A.刚果红能与纤维素形成红色复合物B.刚果红能与纤维二糖形成红色复合物C.刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物D.若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌实验设计土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落纤维素分解菌大多分布在____________的环境中。采集土样时，应选择富含纤维素的环境。如树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等等。也可将滤纸埋在土壤中一个月左右，这样会有能分解纤维素的微生物生长。【步骤一】土壤取样富含纤维素〖旁栏思考题〗为什么要在富含纤维素的环境中找纤维素分解菌？根据生物与环境的互相依存关系，在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土壤中获得目的微生物的几率要高于普通环境。〖旁栏思考题〗将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？人工设置适宜环境，使纤维素分解菌相对聚集。将纸埋于深约10cm的腐殖土壤中。【步骤二】选择培养选择培养的操作方法将土样加入装有30mL选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养1～2天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养。选择培养的作用：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离得到所需要的微生物。注：此步可省略1、纤维素分解菌选择培养基属于______（固体、液体）培养基，原因是__________________。阅读资料二“选择培养基”，回答以下几个问题：液体没有添加琼脂成分2、该培养基对微生物______（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是____________________________________________________________。以纤维素粉为主要碳源，只有能分解纤维素的微生物可以大量繁殖具有按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的样品进行等比稀释，稀释最大倍数到106【步骤三】梯度稀释1.制备培养基:参照旁栏中的比例2.涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1mL涂布在培养基上，30℃倒置培养【步骤四】将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上参照课本刚果红染色法，挑取产生明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。【步骤五】挑选产生透明圈的菌落刚果红染色法：方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应。方法二：在倒平板时就加入刚果红。染色法优点缺点方法一方法二颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用操作繁琐，刚果红会使菌落之间发生混杂操作简便，不存在菌落混杂问题产生淀粉...
