选择性分离放线菌VIP免费

：第l8卷第2期无锡轻工大学学报l999年6月JournalofWuxiUniversityofLightIndustryVo【_18，No．ZJun，l999文章编号：1001—7453(1999)02—004505选择性分离放线菌／／、1o焦太，恶葛健摘要：进行了土样的预处理试验，探讨了平板培养基中抑制剂重酪酸钾的最适浓度．结果表明，选择性分离放线菌的比较适宜的方法为：采集的土样在28℃或室温条件下风干10~20d后t将土壤悬浮液(10)于40C和pH7的条件下，加6％酵母膏和0．05％SDS(5mmol／L磷酸缓冲液)．震荡2Orain，水稀释至1oI或土壤悬浮液(10)于5O℃和pH7的条件F．加5％胨和0．05SDS(5mmot／L磷酸缓冲液)，震荡10rain，水稀释至10然后用平板稀释法接菌在高氏台成1号琼脂+重酪酸钾(质量浓度为250mg／I)的平板培养基上．培养7d后挑菌分离．关键词：放线中图分类号：Q93缒辑十岛自从Waksman和Umezwa揭示放线菌用途的多样性以后，人们发现放线菌作为抗生素、维生素、酶和酶抑制剂的产生菌具有重大的经济意义，已报道的8000种生物活性物质，70％左右来自放线菌．迄今为止能够从天然基质上分离出来进行人工培养的放线菌，只占确知存在的放线菌总数中的一小部分．国内外有关研究单位对放线菌分离方法的保密，阻碍着放线菌分离技术的提高．据杨宇容等报道，重铬酸钾对土壤真菌、细菌有明显的抑制作用，而对放线菌无抑制作用，可作为选择性分离放线菌的一种高效、便宜的抑制剂．Okami等r3]认为酵母膏等物质可活化土壤中放线菌的休眠孢子，而SDS(十二烷基硫酸钠)可杀死土壤细菌和部分放线菌孢子，但这一作用随着用水稀释很容易消除．Hayakawa等则建议用0、05的SDS(5mmol／L磷酸缓冲液配制)加6的酵母膏于40℃震荡20min．Ladislav等的实验证明，加热处理可除去大多数无孢子菌体．本文中对放线菌的选择性分离法进行了研究，以期得到一套比较完整、有效的分离方法、1材料与方法1．1培养基殛分离方法培养基采用高氏合成1号琼脂培养基；放线菌分离用平板稀释法，涂布平板后培养7d，观察结果．收稿日期：1998—10—23；修订日期#1999—0227作者简介：徐成勇(1967年6月生)，男，安徽桐城人，博士研究生耋fj维普资讯http://www.cqvip.comI．2土样无锅市郊梅囝区水稻田土，编号229，水份含量较高l无锡市郊梅囝区菜地土．编号230，水份含量中等+无锡市郊梅曰区山坡土，编号231．水份含量较低．1．3平板培养基中抑制荆I铬酸钾浓度的确定231号土样28℃条件下风干10d后，土壤稀释液(10)涂平板．每一处理有3个重复．培养基中抑制剂重铬酸钾的质量浓度为。0，25，50，100，200．300．400，500，单位为mg／L．记录平板上的真菌、细菌和放线菌的菌落数．I．4土样预处理方法土样采集盾．在平板稀释法分菌前经过两个阶段的预处理．第一阶段的预处理有5种方法；1)采集的土样不作处理l2)采集的土样于50℃高温处理lhl3)采集的土样于120℃高温处理lhl4)采集的土样于28℃条件下风干10dI5)采集的土样于28℃条件下风干20d．第二阶段的顶处理有7种方法；1)土壤悬浮液(10)．40℃．pH7，6酵母膏震荡20rain，水稀释至lOI2)土壤悬浮液(10)．40℃．pH7．0．05SDS(5mmol／L磷酸缓冲液)．震荡20min，水稀释至lOI3)土壤悬浮液(10)．40℃，pH7，6酵母青+0．05SDS(5mmol／L磷酸缓冲液)．震荡20rain．水稀释至lOI；{4)土壤悬浮液(10)，5O℃，pH7．6胨，震荡10rain．水稀释至lO。。}5)土壤悬浮液(10)，50℃，pH7，0．05SDS(5mmoi／L磷酸缓冲液)，震荡10rain，水稀释至l0l6)土壤悬浮液(10)．50℃．pH7．6胨+0．05SDS(5mmol／L磷酸缓冲液)．震荡10min，水稀释至10l7)土壤悬浮液(10)直接稀释至lO。．将35个顶处理所得土壤悬浮液涂布平板，其中抑制剂重铬酸钾的质量浓度定为250mg／L．每个处理3个重复，记录真菌、细菌和放线菌的菌落数．土样放置冰箱，4℃条件下30d后再次进行土样的璜处理．处理方法不变．2结果与讨论2．I平板培养基中抑制剂I铬酸钾质量浓度的确定培养7d后的观察结果见表1．衰I从表l可以看出，培养基中加入重铬酸钾的质量浓度为0~200mg／L时．放线菌菌落数大致保持在同一个水平．而细菌菌落数和真菌菌落数下降显著．当重铬酸钾质量浓度为300～500mg／L时，虽然细菌和真菌的生长...