选修3现代生物科技专题第一讲基因工程基础知识要打牢[教材知识问题化梳理]一、1.(1)原核(2)核苷酸序列磷酸二酯键(3)黏性末端2．大肠杆菌黏性末端和平末端3.(1)双链环状DNA分子限制酶标记基因(2)动植物病毒二、(1)基因文库PCR技术(2)启动子标记基因(3)农杆菌转化法花粉管通道法显微注射(4)DNA分子杂交分子杂交抗原—抗体杂交个体生物学水平三、(1)蛋白质结构(3)氨基酸序列[效果自评组合式设计]一、1.×2.×3.×4.√5.√6.×7.√8.×9.√10.×二、(1)能转移到受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。(2)利用农杆菌T－DNA的可转移性，将目的基因插入T－DNA上通过农杆菌的转化，将目的基因导入受体细胞，并整合到植物细胞的染色体上。(3)双子叶植物和裸子植物。高频考点要通关[需重点强化的2个重难点]例1：解析：选C图中pBR322质粒、抗病基因和重组质粒都是DNA分子，其基本组成单位都是脱氧核苷酸；通过分析含抗病基因的DNA，可知该DNA含三个限制酶切割位点，其中SmaⅠ的切割位点位于抗病基因内部，因此用PstⅠ、EcoRⅠ才能完整地切下该抗病基因；一个质粒被限制酶EcoRⅠ、PstⅠ、SmaⅠ同时切割后可得到3个DNA片段，产生6个末端，从表格信息可知，EcoRⅠ、PstⅠ切割产生的4个末端是黏性末端，而SmaⅠ切割产生的2个末端是平末端；当EcoRⅠ切割质粒时，氨苄青霉素抗性基因(Ampr)已受到破坏，因此，在筛选时，应将受体细胞置于含有四环素的培养基上培养。例2：解析：(1)如果目的基因比较小，核苷酸序列又已知可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。(2)②过程中应先用同一种限制酶切割目的基因和载体，然后用DNA连接酶将切下来的DNA片段拼接成重组DNA。构建的基因表达载体除了目的基因和标记基因外，还必须有启动子、终止子。(3)基因工程用酵母菌作为受体细胞，是因为它具有繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等特点；将目的基因导入酵母菌时，首先用Ca2＋处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后将重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收重组DNA分子，完成转化过程。(4)检测目的基因是否翻译成蛋白质的方法是从重组酵母菌中提取蛋白质，且相应的抗体进行抗原—抗体杂交，若有杂交带出现，表明目的基因已表达。答案：(1)化学方法直接人工合成(2)限制酶和DNA连接酶启动子终止子(3)繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等Ca2＋(4)抗原—抗体杂交[需特别关注的1个易失分点]1．选CDNA聚合酶只能从引物末端延伸DNA而不能延伸RNA；限制酶水解相邻核苷酸间的化学键打断DNA；DNA连接酶可将末端碱基互补的两个DNA片段连接；逆转录酶以一条RNA为模板合成互补的DNA。2．选D蛋白质工程的基本途径是从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列，进而生产相应的蛋白质。图中新的干扰素基因导入受体细胞中表达新的干扰素，说明该过程涉及基因工程技术。解题训练要高效1．选D大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，也有少数限制酶的识别序列由4、5或8个核苷酸组成；DNA连接酶包括E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶，前者只能将双链DNA片段互补的黏性末端连接起来；在基因工程操作中真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。2．选D目的基因若用限制酶Ⅰ切割时，只能在目的基因的一侧切开，而不能将其切下；质粒若用限制酶Ⅱ切割，两种标记基因均将被破坏，所以只能用限制酶Ⅰ切割质粒。3．选A蛋白质工程是利用基因工程手段，包括基因的定点突变和基因表达对蛋白质进行改造，以期获得性质和功能更加完善的蛋白质分子。由题意知该技术属于蛋白质工程。4．选C利用蛋白质工程生产蛋白质产品应通过改造相应基因后，再经基因表达大量产生。5．解析：(1)过程①为基因表达载体的构建，该过程涉及的工具酶为限制性核酸内切酶和DNA连接酶，需用限制酶切开载体以插入let7基因。完整的基因表达载体包括启动子、目的基因、终止子和标记基因等，而启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点。(2)进行过程②时，用胰蛋白酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于细胞的传代培养。(3...
