（1）基因工程的诞生Ⅰ（2）基因工程的原理及技术Ⅰ（3）基因工程的应用Ⅰ第一章P1：基因工程的核心？－－构建重组DNA分子（基因表达载体的构建）基因工程诞生的基础DNA是遗传物质的发现DNA双螺旋结构的确立中心法则P1：基因工程的核心？－－构建重组DNA分子（基因表达载体的构建）①限制性核酸内切酶（限制酶）②DNA连接酶③载体（运载体）三大工具工具酶仅指限制酶和DNA连接酶，不包含载体。工具与工具酶的区别基因工程的技术保障1、作用特点：①特定的序列＋特定的位点②对外不对内2、作用的本质：在特定位点水解磷酸二酯键，把DNA分子切成片段3、效果：形成黏性末端或平末端限制酶所识别的序列有什么特点？…GAATTC……CTTAAG…反向对称重复排列(回文结构)EcolI↑↓什么叫黏性末端？什么叫黏性末端？当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。特点：单链凸出G//CTTAAAATTC//G什么叫平末端？什么叫平末端？当限制酶从识别序列的中心轴线处切当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的开时，切开的DNADNA两条单链的切口，是两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平整的，这样的切口叫平末端平末端。。特点：没有单链凸出CCCGGGGGGCCCCCCGGGGGGCCCSmaⅠ先将告知的单链变双链，明确识别序列及其碱基对数，然后根据切点画出黏性末端，对不同限制酶的末端进行比较作出答案。下面是5种限制酶对DNA分子的识别序列和剪切位点图（箭头表示剪切点、切出的断面为黏性末端）。限制酶1：—↓GATC—限制酶2：—CATG↓—限制酶3：—G↓GATCC—限制酶4：—CCGC↓GG—限制酶5：—↓CCAGG—下例叙述正确的是（）A．限制酶2和4识别的序列都包含4个碱基对B．限制酶3和5识别的序列都包含5个碱基对C．限制酶1和2切出的黏性末端相同D．限制酶1和3切出的黏性末端相同为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解，分析片段大小。下表是某小组进行的相关实验：(1)由实验可知，在这段已知序列上，A酶与B酶的识别序列分别为_____个和_______个。已知一线性DNA序列共有5000bp（bp为碱基对）第一步水解产物（单位bp）第二步水解产物（单位bp）A酶切2100将第一步水解产物分离后，分别用B酶切割1900200140080060010001000500500B酶切2500将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割1900600130080050012001000200经A、B酶同时切19001000800600500200(2)根据表中数据，请在下图中标出相应限制性酶的酶切位点并注明相关片段的大小。已知一线性DNA序列共有5000bp（bp为碱基对）第一步水解产物（单位bp）第二步水解产物（单位bp）A酶切2100将第一步水解产物分离后，分别用B酶切割1900200140080060010001000500500B酶切2500将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割1900600130080050012001000200经A、B酶同时切1900100080060050020050080060019002001000B酶B酶A酶A酶A酶AGATCCTCTAGG(3)已知BamHI与BglⅡ的识别序列及切割位点如图所示，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHI和BglU识别序列的DNA分子进行：反复的切割、连接操作，若干循环后和_______序列明显增多。－A－TCTAGGATCT－A－－G－CCTAGGATCC－G－GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGGCTTAAAATTCGGCTTAAAATTCGGCTTAAAATTCGEcolⅠ切割DNA连接酶在脱氧核糖与磷酸基之间形成磷酸二酯键DNA连接酶DNA聚合酶对象不同本质相同结果不同DNA连接酶分为两类：①从大肠杆菌中分离得到：EcolⅠDNA连接酶，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接。②从T4噬菌体中分离到：T4连接酶，既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。DNA连接酶与DNA聚合酶的比较将与模板链碱基互补配对的脱氧核苷酸连接起来形成子链将两个DNA分子连接起来形成重组DNA分子能将外源基因送入受体细胞的工具就是载体。种类：质粒、噬菌体和动、植物病毒转基因技术的核心是构建重组DNA分子重组DNA...
