氨基酸的薄层层析VIP免费

实验 4 氨基酸的薄层层析一、实验原理薄层层析是一种将固定相在固体上铺成薄层进行层析的方法。由于该方法具有操作简便、层析展开时间短、灵敏度高、结果可视化等优点，已被广泛应用于生物化学、医药卫生、化学工业、农业生产和食品等领域，对天然化合物的分离和鉴定也已广泛应用。薄层层析时一般将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开。本实验应用硅胶作为固相支持物，用羧甲基纤维素钠作为粘合剂，以正丁醇、冰醋酸及水的混合液为展开剂，测定混合氨基酸中各分离斑点的 Rf值（Rf值详见第一篇第三章第五节），以分离和鉴别混合氨基酸的成分。氨基酸的显色反应：茚三酮水化后生成水化茚三酮，它与氨基酸发生羧基反应生成还原茚三酮、氨基醛，与此同时，还原茚三酮又与氨基茚三酮缩合生成蓝色化合物而使氨基酸斑点显色。二、实验材料（一）样品1．氨基酸标准溶液：（1）O.Olmol/L 丙氨酸：称取丙氨酸 8.9mg 溶于 90%异丙醇溶液至 10ml。（2）0.01mol/L 精氨酸：称取精氨酸 17.4mg 溶于 90%异丙醇溶液至 10ml。（3）0.01mol/L 甘氨酸：称取甘氨酸 7.5mg 溶于 90%异丙醇溶液至 10ml。2 .混合氨基酸溶液：将 0.01mol/L 丙氨酸、精氨酸、甘氨酸按等体积制成混合溶液。二）试剂a. 玻璃板要清1．硅胶 G（C.P.）2 .0.5%羧甲基纤维素钠（CMCNa）:取羧甲基纤维素钠 5g 溶于 1000ml 蒸馏水中，煮沸，静置冷却，弃沉淀，取上清备用。3 •展开溶剂：按 80:10:10 比例（V/V）混合正丁醇、冰醋酸及蒸馏水，临用前配制。4 .0.1%茚三酮溶液：取茚三酮（A.R.）0.1g 溶于无水丙酮（A.R.）至 100ml。5 •展层-显色剂：按照 10:1 比例（V/V）混匀展开剂和 0.1%茚三酮溶液。（三）仪器及器材1•层析板（6x15cm）；2.小烧杯；3.量筒（10mL）；4.小尺子；5.吹风机；6.毛细玻璃管；7.层析缸；8.烘箱。三、实验步骤（一）实验流程制板点样 匸 层析 L 显色（二）操作步骤1•制板（1）调浆：称取硅胶 3g，加 0.5%的羧甲J 基纤维素钠 8ml，调成均匀的糊状。（2）涂布：取洁净的干燥玻璃板 a均匀涂2．点3．层强的边缘效应。c.应逐步加温，温度过高易导致涂层...