土壤微生物生物量的测定方法1 土壤微生物碳的测定方法（熏蒸提取 ----仪器分析法）1.1 基本原理新鲜土样经氯仿熏蒸后 （24h），土壤微生物死亡细胞发生裂解，释放出微生物生物量碳，用一定体积的0.5mol/LK 2SO4 溶液提取土壤，借用有机碳自动分析仪测定微生物生物量碳含量。 根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机碳的差值及转换系数（ KEC），从而计算土壤微生物生物量碳。1.2 实验仪器自动总有机碳（ TOC）分析仪（Shimadzu Model TOC— 500,JANPAN）、真空干燥器、烧杯、三角瓶、聚乙烯熟料管、离心管、滤纸、漏斗等。1.3 实验试剂1）无乙醇氯仿（ CHCL 3）；2）0.5mol/L 硫酸钾溶液：称取87g K2SO4溶于 1L 蒸馏水中3）工作曲线的配制：用0.5mol/L 硫酸钾溶液配制10ugC/L、30ugC/L、50ugC/L、70ugC/L、100ugC/L 系列标准碳溶液。（其实一般情况下，仪器会自带的标曲，一般不用自己做的）1.4 操作步骤1.4.1 土壤的前处理（过筛和水分调节略）1.4.2 熏蒸称取新鲜（相当于干土10.0g，这个可以根据自己土样的情况而定）3 份分别放入 25ml 小烧杯中。将烧杯放入真空干燥器中，并放置盛有无乙醇氯仿（约2/3）的 15ml 烧杯 2 或 3 只，烧杯内放入少量防暴沸玻璃珠，同时放入一盛有NaOH 溶液的小烧杯，以吸收熏蒸过程中释放出来的CO2，干燥器底部加入少量水以保持容器湿度。 盖上真空干燥器盖子， 用真空泵抽真空， 使氯仿沸腾 5 分钟。关闭真空干燥器阀门，于25℃黑暗条件下培养24 小时。1.4.2 抽真空处理熏蒸结束后， 打开真空干燥器阀门 （应听到空气进入的声音， 否则熏蒸不完全，重做），取出盛有氯仿（可重复利用）和稀NaOH 溶液的小烧杯，清洁干燥器，反复抽真空（5 或 6 次，每次 3min，每次抽真空后最好完全打开干燥器盖子） ，直到土壤无氯仿味道为止。 同时，另称等量的 3 份土壤， 置于另一干燥器中为不熏蒸对照处理。（注意：熏蒸后不可久放，应该快速浸提） ※1.4.4 浸提过滤从干燥器中取出熏蒸和未熏蒸土样，将土样完全转移到80ml 聚乙烯离心管中，加入 40ml 0.5mol/L 硫酸钾溶液 （土水比为 1:4，考虑到土样的原因，此部分熏蒸和不熏蒸土均为4g，即，4g土：16ml 的硫酸钾溶液，当然这个加入量要根据 TOC 仪器的进入量决定） 300r/min 振荡 30min，用中速定量滤纸过滤。同时作 3 个无土壤基质空白。 土壤提取液最好立即分析， 或— 20℃冷冻保存 （但使用前需解...
