冻干基因工程α2a干扰素制造及检定规程VIP免费

冻干基因工程 α 2a干扰素制造及检定规程 本品系用带有人 α 2a型干扰素基因重组质粒的大肠杆菌，经发酵培养及单克隆抗体亲和层析后精制而成。用于治疗某些病毒性疾病及部分肿瘤疾病。 1 菌种 1.1菌种来源 基因工程α 2a干扰素工程菌由带有人α 2a干扰素基因的重组质粒转化大肠杆菌而来。投产的工程菌需经卫生部批准。 1.2菌种特性 菌种表达稳定，表达水平符合投产菌种要求。 1.3制造用菌种库的建立 从原始菌种库传出，经扩大后冻干保存，或由上一代制造用菌种库传出，扩大后冻干保存作为制造用菌种库，但每次只限传三代。每批制造用菌种库均进行下列检定，合格后方可投产。 1.3.1划种 LB琼脂平板 应呈典型大肠杆菌集落形态，无其他杂菌生长。 1.3.2涂片革兰氏染色 在光学显微镜下观察，应为典型的革兰氏阴性杆菌。 1.3.3对抗生素的抗性 应与原始菌株相符。 1.3.4电镜检查 应为典型大肠杆菌形态，并证明无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。 1.3.5生化反应 应符合大肠杆菌生物学性状。 1.3.6干扰素的表达量 在摇床培养，应符合原始菌种的表达量。 1.3.7质粒检查 应做该质粒的酶切图谱，并应与原始质粒相符。 1.3.8表达的干扰素型别 应用标准抗α 干扰素血清做中和试验，证明型别正确。 1.4 生产菌种 从制造用菌种库传出供生产用的菌种，称为生产菌种。 1.4.1生产菌种的制备及检定 取制造用菌种库冻干菌种开启后划种LB 平板2～3 块，培养后挑取平板中5 ～10个菌落，分别培养后保存，然后每个菌落分别进行干扰素表达量测定，至少重复一次，选出其中干扰素表达量最高的一份，供生产制备种子液用，其表达量应符合原始菌种的表达量。 1.5 种子液 从生产菌种选出的菌种供做发酵用的称“种子液”。种子液的制备：将 1.4.1项检定合格的生产菌种，根据实际需要做扩充传代，作为罐培养的种子液。 2 发酵培养 2.1 空罐灭菌和实罐灭菌严格按照使用说明书要求操作。 2.2 发酵培养基 应为适 于 发酵培养的培养基，根据菌种的抗生素抗性 ，培养若 中允 许 加 入 少量抗生素，但 应尽 量避 免 含 有β 椖 邗 ０ 防 嗫 股  亍 ?/P> 2.3 发酵培养参 数 根据工 程 菌和发酵工 艺 要求设 置 和变 换 各 项培养参 数 。 3 收 集 菌体 用离 心 法 或 其他 适 宜 方 法 收 集 菌体 ，菌体 可 在?/FONT>20℃ 下 保存1 年 。 4 菌体 裂 解 用盐...