肝糖原的提取、鉴定与定量试验报告VIP免费

南方国科大学生物化学实验报告姓 名:学 号:专业年级:组 别:生物化学与分子生物学实验教学中央实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期实验地点合作者指导老师评分XX 教师签名李某某批改日期 2021-06-03格式要求：正文请统一用：小四号,宋体,1.5 倍行距；数字、英文用 Times New Roman；标题用：四号,黑体,加粗.需强调的地方请用蓝颜色标出.不得出 现多行、多页空白现象.一、实验目的1、掌握组织样品的制备方法,了解其考前须知.2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和考前须知, 掌握其操作方法.3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器.4、熟练运用溶液混匀的各种方法.5、正确掌握溶液转移的操作.6、正确操作使用分光光度计.二、实验原理1、肝糖原的提取与鉴定糖原储存于细胞内,采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎,低浓度的三氯醋酸能使蛋 白质变性,破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质,而糖原仍稳定地保存于上清液中,从而使 用糖原与蛋白质等其它成分别离开来.糖原不溶于乙醇而溶于热水,故先用 95%乙醇将 滤液中糖原沉淀,再溶于热水中.糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色.这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中,依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色.糖原还可被酸水解为葡萄糖,利用呈色反响 和葡萄糖的复原性,可判定肝组织中糖原的存在.CuSO4 十 2NaOH = Na2sO4+Cu(OH)212Cu(OH)2 十 C6Hl2O6 = 2CuOH 十氧化型葡萄糖+H2O2CuOH = Cu20M 红色)+H2OCu(OH)2= Cu01(黑色)+H2O2、肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖,浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物一 一 5-羟甲基呋喃甲醛,此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物.该物质在 620nm 处有最大吸收.糖含量在(10〜100)g 范围内,溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比. 利用此反响与同样处理的葡萄糖含量标准溶液比色,通过标准对照法(直接比拟法) 即可计算出样品中糖原的含量.糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前,肝组织先 谿于浓碱中加热,以破坏其它成分,而保存肝糖原.三、材料与方法：以流程图示意1、材料：(1)样品：鸡肝(2)试剂：95%乙醇、5% (W/V)m 氯乙酸、浓盐酸、12.5mol/L (50%) NaOH 溶液、 碘试剂、班氏试剂、5.35mol/L (30%) KOH 溶液、标准葡萄糖液(50mg/L)、蒽酮显 色剂(3)仪器和器材：普通离心机、室温-100℃恒温水浴箱、可见光分光光度计、托盘天 平、剪刀、镊子、研钵、试管架、离心管、试管、100m...