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木质素酶活力的测定方法VIP免费

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1前 言草菇是一种著名的食用菌,营养丰富,味鲜美,深受人们的喜爱。草菇子实体含有人体必需的 8 种氨基酸,占其他氨基酸总量得38.2%,还含有 14 种维生素[1] ,不愧为一种比较理想的天然保健食品。草菇喜高温高湿,生长速度快,生长周期短,一糙只需25天左右,在广西每年4 月至 9 月均可以种植,是一种很有发展前途的食用菌,生产和市场前景广阔。栽培草菇的生物学效率比较低(鲜菇与栽培料的比值),用稻草栽培草菇的生物学效率大都在 10— 15%左右。过去研究认为草菇主要利用纤维素、淀粉,不大利用半纤维素以及木质素。因为草菇的半纤维素酶活性低,又缺乏降解木质素的酶类,但是农作物秸杆中一般含有半纤维素15— 30%,木质素占 10— 30%。为此,本试验用透明圈法、氧化圈法观测 V 展 1、V 展 2、V 展 3、V6、V 广、V11六个菌株所产的胞外酶利用分解半纤维素,木质素的能力,看是否能够从其中初步筛选出利用半纤维素、木质素较强的菌株来。探讨更合理地配制栽培料的途径对提高草菇的生物转化率有重要意义。2 实验原理半纤维素是由五个碳原子为主的木糖聚合的高分子化合物,经木聚糖酶降解利用之后,基质生成透明圈[2] 。木质素是以苯环为基本结构的复杂大分子的有机化合物,含碳60— 66%,在多酚氧化酶、过氧化酶降解后,能与愈创木酚进行反应生成棕红色或棕褐色轮环[3] 。亮兰试剂与蛋白质结合兰青色、在与过氧化酶作用则呈黄色透明圈[4] 。通过相应的平板基质培养,草菇菌丝分泌的酶类降解利用后,形成的透明圈迟早、直径大小、色泽深度等初步判断是否存在半纤维素酶和木质素酶降解酶类及其活性。3 材料与方法3.1 材料3.1.1 菌株V9购至广西大学微生物研究所,V 广、V11购至广西农业科学院生物技术研究所,V 展 1、V 展 2、V 展 3采至广西现代农业展示中心经组织培养所得。3.1.2 试剂可溶性淀粉、亮兰溶液自配、半纤维素自已提制、愈创木酚为国产分析纯、木聚糖为进口。3.2 试验方法3.2.1 试剂配制3.2.1.1 亮兰溶液配制25 ml 亮兰溶于 25ml 浓度为 90%乙醇中,加入 85%的 H3PO4,最后定溶至 500ml,灭菌。3.2.1.2 愈创木酚试剂配制:0.4ml 愈创木酚药品,用100ml 水酒精溶解。3.2.2 半纤维素提取3.2.2.1 稀酸高温提取法[5] 50g 玉米芯装入 500 ml 三角瓶加入 0.1%的硫酸 0.5ml, 加无菌水至 500ml,60 ℃下浸泡 12h, 去渣取液→按原料干重加水至500ml→浴煮 10min(120℃高...

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