附件 1水产品中孔雀石绿的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201701）1范围本方法规定了水产品及其养殖用水中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量的胶体金免疫层析快速检测方法。本方法适用于鱼肉及养殖用水中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量的快速测定。2原理样品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿经有机试剂提取，吸附剂净化，正己烷除脂后，加入氧化剂将隐色孔雀石绿氧化成为孔雀石绿，经浓缩复溶后，孔雀石绿与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量进行定性判定。3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。3.1试剂3.1.1正己烷。3.1.2乙腈。3.1.3冰乙酸。3.1.4盐酸。3.1.5吐温-20。3.1.6氯化钠。3.1.7对-甲苯磺酸。3.1.8无水乙酸钠。3.1.9盐酸羟胺。3.1.10无水硫酸钠。3.1.11中性氧化铝：层析用，100 目~200 目。3.1.12二氯二氰基苯醌。3.1.13氯化钾。3.1.14磷酸二氢钾。3.1.15十二水合磷酸氢二钠。3.1.16饱和氯化钠溶液：称取氯化钠（3.1.6）200g，加水 500mL，超声使其充分溶解。3.1.17盐酸羟胺溶液（0.25g/mL）：称取 2.5g 盐酸羟胺（3.1.9），用水溶解并稀释至 10mL，混匀。3.1.18乙酸盐缓冲液：称取 4.95g 无水乙酸钠（3.1.8）及 0.95g 对-甲苯磺酸（3.1.7）溶解于 950mL水中，用冰乙酸（3.1.3）调节溶液 pH 为 4.5，用水稀释至 1L，混匀。3.1.19二氯二氰基苯醌溶液（0.001mol/L）：称取0.0227g 二氯二氰基苯醌（3.1.12）置于 100mL棕色容量瓶中，用乙腈（3.1.2）溶解并稀释至刻度，混匀。4℃避光保存。3.1.20复溶液：称取8.00g 氯化钠（3.1.6），0.20g 氯化钾（3.1.13），0.27g 磷酸二氢钾（3.1.14）及 2.87g 十二水合磷酸氢二钠（3.1.15）溶解于 900mL 水中，加入 0.5mL 吐温-20（3.1.5），混匀，用盐酸（3.1.4）调节 pH 为 7.4，用水稀释至 1L，混匀。3.2参考物质孔雀石绿、隐色孔雀石绿参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥90%。表 1孔雀石绿、隐色孔雀石绿参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量序号12中文名称孔雀石绿隐色孔雀石绿英文名称MalachiteGreenLeucomalachiteGreenCAS登录号569-64-2129-73-7分子式C23H25ClN2C23H26N2相对分子质量364.91330.47注：或等同...
