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NGAL-mRNA荧光定量PCR检测方法的建立及初步评价的开题报告

NGAL-mRNA荧光定量PCR检测方法的建立及初步评价的开题报告_第1页
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精品文档---下载后可任意编辑NGAL mRNA 荧光定量 PCR 检测方法的建立及初步评价的开题报告引言NGAL,即嗜铁性蛋白结合物(neutrophil gelatinase-associated lipocalin),是一种小分子前炎症因子,已被证实与急性肾损伤(AKI)的诊断、预测和监测密切相关。PCR(聚合酶链反应)技术通过扩增基因片段来检测某种基因的表达水平,已成为生命科学中最基本、最常用的实验技术之一。在本次实验中,我们尝试建立 NGAL mRNA 荧光定量 PCR 检测方法,以期为 AKI 的早期诊断提供可靠的检测手段。目的本实验旨在建立 NGAL mRNA 荧光定量 PCR 检测方法,并对其进行初步评价。方法1. 样本处理:选取 40 例急性肾损伤患者和 40 例健康人作为讨论对象,从每名患者搜集 5 mL 外周血和 5 mL 尿液,进行离心和冻存处理。2. RNA 提取:采纳 RNAprep Pure Cell/Bacteria Kit 进行 RNA 提取。3. 反转录:采纳 PrimeScript RT reagent Kit 进行反转录。4. PCR 扩增:采纳 AccuPower PCR PreMix 进行 PCR 扩增。5. 荧光定量 PCR:采纳 SYBR Green Realtime PCR Master Mix 进行荧光定量 PCR,分析所有样本内部对比 GAPDH 和外部对比 NGAL mRNA 的表达水平,计算其相对表达量。结果1. 所有患者和健康人的 NGAL mRNA 表达量均被成功检测到。2. 急性肾损伤患者的 NGAL mRNA 表达量显著高于健康人(P<0.01)。3. 外周血和尿液中 NGAL mRNA 的表达量存在一定的相关性(r=0.68,P<0.01)。结论本实验成功建立了 NGAL mRNA 荧光定量 PCR 检测方法,并初步证明其可以用于急性肾损伤的诊断和监测。该方法具有操作简便、成本低廉、高灵敏度和高特异性的优点,有望成为 AKI 的一种可靠的诊断工具。

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