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白细胞的检测方法

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1 第四章 白细胞检验的基本方法 第一节 白细胞功能的检验 一、墨汁吞噬试验 【目的】 掌握墨汁吞噬试验的原理、方法、注意事项和临床意义。 【实验原理】 墨汁吞噬试验(ink phagocy tosis test)是依据血液中的中性粒细胞及单核细胞对细菌、异物等具有吞噬作用,在一定量的肝素抗凝血中,加入一定量的墨汁,经 37℃温育 4h,涂片染色后,在显微镜下观察吞噬细胞对墨汁的吞噬情况,并计算吞噬率及吞噬指数,从而协助急性白血病的诊断与鉴别。 【材料】 1.器材 试管、移液管、微量移液器、载玻片、37℃水浴箱、显微镜等。 2.试剂 (1)肝素:配成 6U/ml 水溶液。 (2)制备墨汁:于普通砚台上加生理盐水 5ml,以优质中国块墨或印度墨,以100r/min研磨3min。所得墨汁经普通滤纸过滤3 次备用。 (3)瑞氏染液等。 【方法步骤】 1.取小试管 1 支,加肝素 20μl,加外周血 100μl,混匀。 2.加入过滤墨汁 10μl,混匀,加塞。 3.置37℃温育 4h。 4.取温育后样本,推制成血涂片,干燥后,瑞氏染色。 5.油镜下观察计数幼稚细胞或中性成熟粒细胞 100 个;计数单核细胞 20 个。 6.判断结果 根据细胞吞噬墨粒多少及大小,可定为下列程度: 阴性:细胞内未见吞噬墨粒。 阳性:(+) 细胞内吞噬有小墨粒 1~5 个。 (++) 细胞内吞噬有大小不等墨粒 10 个左右。 (+++) 细胞内吞噬有大墨粒 10 个左右,小墨粒较多。 (++++) 细胞内吞噬有多数大颗墨粒,并有块状、球状,小墨粒很多,但细胞核清楚。 7.计算吞噬率及吞噬指数 吞噬率(%)= ×100% 吞噬指数= 【注意事项】 肝素剂量对白细胞的吞噬功能有影响,肝素用量过大,细胞形态异常,吞噬率和吞噬指数降低;肝素用量过小,影响抗凝。以每 100μl 血用 0.3U 肝素为最适宜。 【参考范围】 成熟中性粒细胞吞噬率 59~89%,吞噬指数 66~186; 成熟单核细胞吞噬率 90~100%,吞噬指数 227~399。 【临床意义】 临床上可利用该试验了解吞噬细胞的吞噬功能,对白血病的诊断和分型有一定参考价值。粒细胞仅成熟阶段才具有吞噬功能,单核细胞幼稚阶段和成熟阶段均具有吞噬能力。AML-M5a 为弱阳性,M5b 吞噬指数明显增高。AML-M2、ALL 和 AML-M3 吞噬试验均为阴性,AML-M4 呈阳性反应。CML 的成熟粒细胞吞噬能力明显降低。 二、白细胞吞噬功能试验 【目的】 掌握白细胞吞噬功能试验的原理、方法、注意事项和临床意义。 ...

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