白细胞的检测方法

1 第四章 白细胞检验的基本方法 第一节 白细胞功能的检验 一、墨汁吞噬试验 【目的】 掌握墨汁吞噬试验的原理、方法、注意事项和临床意义。 【实验原理】 墨汁吞噬试验（ink phagocy tosis test）是依据血液中的中性粒细胞及单核细胞对细菌、异物等具有吞噬作用，在一定量的肝素抗凝血中，加入一定量的墨汁，经 37℃温育 4h，涂片染色后，在显微镜下观察吞噬细胞对墨汁的吞噬情况，并计算吞噬率及吞噬指数，从而协助急性白血病的诊断与鉴别。 【材料】 1．器材 试管、移液管、微量移液器、载玻片、37℃水浴箱、显微镜等。 2．试剂 （1）肝素：配成 6U/ml 水溶液。 （2）制备墨汁：于普通砚台上加生理盐水 5ml，以优质中国块墨或印度墨，以100r/min研磨3min。所得墨汁经普通滤纸过滤3 次备用。 （3）瑞氏染液等。 【方法步骤】 1．取小试管 1 支，加肝素 20μl，加外周血 100μl，混匀。 2．加入过滤墨汁 10μl，混匀，加塞。 3．置37℃温育 4h。 4．取温育后样本，推制成血涂片，干燥后，瑞氏染色。 5．油镜下观察计数幼稚细胞或中性成熟粒细胞 100 个；计数单核细胞 20 个。 6．判断结果 根据细胞吞噬墨粒多少及大小，可定为下列程度： 阴性：细胞内未见吞噬墨粒。 阳性：(+) 细胞内吞噬有小墨粒 1～5 个。 (++) 细胞内吞噬有大小不等墨粒 10 个左右。 (+++) 细胞内吞噬有大墨粒 10 个左右，小墨粒较多。 (++++) 细胞内吞噬有多数大颗墨粒，并有块状、球状，小墨粒很多，但细胞核清楚。 7．计算吞噬率及吞噬指数 吞噬率（%）= ×100% 吞噬指数= 【注意事项】 肝素剂量对白细胞的吞噬功能有影响，肝素用量过大，细胞形态异常，吞噬率和吞噬指数降低；肝素用量过小，影响抗凝。以每 100μl 血用 0.3U 肝素为最适宜。 【参考范围】 成熟中性粒细胞吞噬率 59～89%，吞噬指数 66～186； 成熟单核细胞吞噬率 90～100%，吞噬指数 227～399。 【临床意义】 临床上可利用该试验了解吞噬细胞的吞噬功能，对白血病的诊断和分型有一定参考价值。粒细胞仅成熟阶段才具有吞噬功能，单核细胞幼稚阶段和成熟阶段均具有吞噬能力。AML-M5a 为弱阳性，M5b 吞噬指数明显增高。AML-M2、ALL 和 AML-M3 吞噬试验均为阴性，AML-M4 呈阳性反应。CML 的成熟粒细胞吞噬能力明显降低。 二、白细胞吞噬功能试验 【目的】 掌握白细胞吞噬功能试验的原理、方法、注意事项和临床意义。 ...