生物化学实验报告 姓 名： 汪煜灵 学 号： ********** 专业年级： 2013 级临床医学 组 别： 第2 实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心 实验名称 肝糖原的提取、鉴定、分离 实验日期 2 0 1 4 -1 2 -2 5 实验地点 第 2 实验室 合作者 陈海玲 指导老师 朱利娜 评分 教师签名 批改日期 一、实验目的 1、掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。 2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。 3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。 4、熟练运用溶液混匀的各种方法。 5、正确掌握溶液转移的操作。 6、正确操作使用分光光度计。 二、实验原理 肝糖原的提取 糖原储存于细胞内，采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用 95%乙醇将绿叶中糖原沉淀，再溶于热水中。 糖原的鉴定 糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的的存在。 CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4 + Cu(OH)2 2Cu(OH)2 + C6H12O6 = 2CuOH + 氧化型葡萄糖 + H2O 2CuOH = H20 + Cu2O (红 色 ) Cu(OH)2 ==== H2O + CuO (黑 色 ) 肝 糖 原 的 定 量 糖 原 在 浓 酸 中 可 水 解 为 葡 萄 糖 ， 浓 硫 酸 能 使 葡 萄 糖 进 一 步 脱 水 生 成 糠 醛 衍 生物 — — 5-羟 甲 基 呋 喃 甲 醛 ， 此 化 合 物 再 与 蒽 酮 脱 水 缩 合 生 成 蓝 色 的 化 合 物 。该 物 质 在 620nm 处 有 最 大 吸 收 。 糖 含 量 在 10— 100mg 范 围 内 ， 溶 液 颜 色 的 深浅 与 可 溶 性 糖 含 量 成 正 比 。 利 用 此 反 应 与 同 样 处 理 的 已 知 葡 萄 糖 含 量 的 标 准溶 液 比 色 ， 通 过 标 准 对 照 法 即 可 计 算 出 样 品 中 糖 原 的 含 量 。 糖 原 在 浓 碱 溶 液中 非 常 稳 定 ， 故 在 显 色 之 前 ， 肝 组 织 先 置 于...
