芽孢杆菌感受态制作方法

目 录 声 明：...................................... 1 大肠杆菌感受态细胞的制备......................... 2 一、CaCl2 感受态细胞的制备...................................................... 3 二、电转感受态细胞的制备........................................................ 4 枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及转化 ................ 14 农杆菌感受态细胞的制备及转化 ..................... 17 酵母感受态细胞的制备及转化 ...................... 18 关于载体连接的讨论 ............................. 23 -1 - 声 明： 本文所涉及的技术要点主要来源于相关文献、网络和书籍，此外，一些操作中的技巧及经验等来自于本人及同学、朋友的总结，仅供大家参考，同时也请下载者不要传播尤其是以商业为目的的复制、传播等等；如有转载、传播请注明来源于“螺旋网”。若本文侵犯了您的版权或有任何不妥，请Email：lofeel@126.com or helixnet@126.com 告知。 此外，由于学识、经验有限，本文难免会存在一些错误或缺陷，敬请不吝赐教，联系方式：lofeel@126.com or helixnet@126.com ；同时因存在环境、试剂、仪器以及人为等原因，不能保证实验100%的成功，仅供参考。 -2- 大肠杆菌感受态细胞的制备 体外连接的DNA 重组分子导入合适的受体细胞才能大量增殖。野生型 E.co li并不容易转化，这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源 DNA。为了提高受体菌摄取外源 DNA 的能力，提高转化效率以获得更多的转化子，人们摸索出不同的方法处理细菌，经过多年的努力，科学家们发现了可以增加细胞吸收外源 DNA效率的方法，那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对 DNA 的通透性。这种经过理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来 DNA 的生理状态，该细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA 重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收 DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation ），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源 DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化，E.coli 转化就属于工程转化。 对于 E.co li，目前主要采用电转化法和 CaCl...