基因工程基本过程

基因工程基本过程基因工程(genetic engineering），也叫基因操作、遗传工程,或重组体 DNA 技术。它是一项将生物的某个基因通过基因载体运送到另一种生物的活性细胞中，并使之无性繁殖(称之为”克隆"）和行使正常功能（称之为"表达"），从而制造生物新品种或新物种的遗传学技术.一般说来，基因工程是专指用生物化学的方法,在体外将各种来源的遗传物质（同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工合成的 DNA 片段）与载体系统（病毒、细菌质粒或噬菌体)的 DNA 结合成一个复制子。这样形成的杂合分子可以在复制子所在的宿主生物或细胞中复制，继而通过转化或转染宿主细胞、生长和筛选转化子，无性繁殖使之成为克隆。然后直接利用转化子，或者将克隆的分子自转化子分离后再导入适当的表达体系,使重组基因在细胞内表达，产生特定的基因产物.常用的工具酶限制性内切酶—主要用于 DNA 分子的特异切割 DNA 甲基化酶-用于 DNA 分子的甲基化 核酸连接酶-用于 DNA 和 RNA 的连接核酸聚合酶—用于 DNA 和 RNA 的合成核酸酶—用于 DNA 和 RNA 的非特异性切割 核酸末端修饰酶-用于 DNA 和 RNA 的末端修饰 其它酶类-—用于生物细胞的破壁、转化、核酸纯化、检测等。主要过程有为四步:一．获得目的基因有多种方法可获得目得基因1.构建 cDNA 文库分离目的基因过程:（1）从真核细胞中提取 mRNA,以其为模板，在反转录酶的作用下合成 cDNA 的第一条链。（2）以第一条链为模板，以反转录酶或 DNA 聚合酶Ｉ作用下合成 cDNA 的第二条链.（3）在甲基化酶作用下使 cDNA 甲基化.（4）接头或衔接子连接。（5）凝胶过滤分离 cDNA。（6）通过核酸探针法或免疫反应法从 cDNA 文库中分离特异 cDNA 克隆。2。人工化学合成法 适于已知的核苷酸序列且校小的ＤＮＡ片断合成，常用方法有磷酸二酯法、磷酸三酯法、亚磷酸三酯法、固相合成法、自动化合成法等。过程：先用以上方法合成基因 DNA 不同部位的两条链的寡核苷短片段，再退火成为两端形成粘性末端的 DNA 双链片段。然后将这些 DNA 片段按正确的次序进行退火连接起来形较长的ＤＮＡ片段，再用连接酶连接成完整的基因.3。利用 PCR 技术直接扩增目的基因PCR（Polymerase Chain Reaction）法，又称为聚合酶链反应或 PCR 扩增技术，已知待扩增目的基因或 DNA 片段两侧的序列，根据该序列化学合成聚合反应必需的双引物,类似于 DNA 的天然复制过程,用ＰＣＲ法进行...