Hemin诱导K562细胞红系分化过程中BCRabl基因表达的变化及意义 生物学专业VIP专享

中文摘要HEMIN 诱导人白血病细胞 K562 红系分化过程中 BCR/ABL 的变化及其意义背景及目的 目前，对于高铁血红素（Hemin）诱导人白血病 K562 细胞可以导致其向红系分化已经研究的十分明确，关于这一过程中比较明确的机制是利用高铁血红素（Hemin）促进红系特异性转录因子或辅因子的表达,但该过程中 K562 细胞的特异性融合基因 BCR/ABL 有无变化国内外尚未见明确报道。本研究拟通过建立应用高铁血红素（Hemin）诱导 K562 细胞红系分化的模型，从而从宏观上（包括细胞形态的改变、细胞活性的改变），微观上（蛋白和基因水平上）分别探究这一过程中 K562 细胞所发生的变化及 BCR/ABL 融合基因的表达变化,以期待对于白血病细胞的红系分化的内在调控作进一步研究，并为酪氨酸激酶抑制剂（Tyrosine Kinase Inhibitor, TKI）耐药的患者治疗提供新的思路。方法 1.分别应用不同浓度的高铁血红素（Hemin）（0、10、20、30、40、50μmol/L）刺激 K562 细胞 24 小时诱导其红系分化，光学显微镜下观察 Hemin 诱导前后 K562细胞的形态变化；2.联苯胺染色法验证 Hemin 诱导 K562 细胞红系分化；3.采用CCK-8 法分别检测 0、10、20、30、40、50μmol/L 浓度的 Hemin 诱导 24 小时后K562 细胞的增殖活性；4.分别提取不同浓度组细胞的 RNA 及蛋白后做实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR)及蛋白质印迹分析（Western Blot）分别从基因和蛋白水平检测各组细胞中 BCR/ABL 融合基因的表达情况。结果 人白血病 K562 细胞经过不同浓度的 Hemin（0、10、20、30、40、50μmol/L）的诱导 24 小时后，细胞形态与对照组相比体积变大，核浆比例减少，胞质增多；进行 CCK-8 活性检测发现各组细胞的增殖活性较对照组降低；将不同浓度的Hemin 诱导后的 K562 细胞 24 小时后提取 RNA 进行实时荧光定量 PCR 检测发现 BCR/ABL 融合基因的表达下调且下调的程度与 Hemin 的浓度成正比；提取不同浓度 Hemin 诱导 24 小时后的 K562 细胞的蛋白，进行 Western Blot 分析发现随着 Hemin 浓度的升高融合基因蛋白的表达量逐渐减低。结论 Hemin 在诱导 K562 细胞红系分化过程中可 BCR/ABL 融合基因的表达明显受到抑制，且作用呈 Hemin 浓度依赖性。关键词：氯高铁血红素；K562 细胞；红系分化；BCR/ABL 融合基因ABSTRACTChanges and Significances of BCR/ABL Expression During Erythroid Differ...