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Hemin诱导K562细胞红系分化过程中BCRabl基因表达的变化及意义 生物学专业

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中文摘要HEMIN 诱导人白血病细胞 K562 红系分化过程中 BCR/ABL 的变化及其意义背景及目的 目前,对于高铁血红素(Hemin)诱导人白血病 K562 细胞可以导致其向红系分化已经研究的十分明确,关于这一过程中比较明确的机制是利用高铁血红素(Hemin)促进红系特异性转录因子或辅因子的表达,但该过程中 K562 细胞的特异性融合基因 BCR/ABL 有无变化国内外尚未见明确报道。本研究拟通过建立应用高铁血红素(Hemin)诱导 K562 细胞红系分化的模型,从而从宏观上(包括细胞形态的改变、细胞活性的改变),微观上(蛋白和基因水平上)分别探究这一过程中 K562 细胞所发生的变化及 BCR/ABL 融合基因的表达变化,以期待对于白血病细胞的红系分化的内在调控作进一步研究,并为酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine Kinase Inhibitor, TKI)耐药的患者治疗提供新的思路。方法 1.分别应用不同浓度的高铁血红素(Hemin)(0、10、20、30、40、50μmol/L)刺激 K562 细胞 24 小时诱导其红系分化,光学显微镜下观察 Hemin 诱导前后 K562细胞的形态变化;2.联苯胺染色法验证 Hemin 诱导 K562 细胞红系分化;3.采用CCK-8 法分别检测 0、10、20、30、40、50μmol/L 浓度的 Hemin 诱导 24 小时后K562 细胞的增殖活性;4.分别提取不同浓度组细胞的 RNA 及蛋白后做实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹分析(Western Blot)分别从基因和蛋白水平检测各组细胞中 BCR/ABL 融合基因的表达情况。结果 人白血病 K562 细胞经过不同浓度的 Hemin(0、10、20、30、40、50μmol/L)的诱导 24 小时后,细胞形态与对照组相比体积变大,核浆比例减少,胞质增多;进行 CCK-8 活性检测发现各组细胞的增殖活性较对照组降低;将不同浓度的Hemin 诱导后的 K562 细胞 24 小时后提取 RNA 进行实时荧光定量 PCR 检测发现 BCR/ABL 融合基因的表达下调且下调的程度与 Hemin 的浓度成正比;提取不同浓度 Hemin 诱导 24 小时后的 K562 细胞的蛋白,进行 Western Blot 分析发现随着 Hemin 浓度的升高融合基因蛋白的表达量逐渐减低。结论 Hemin 在诱导 K562 细胞红系分化过程中可 BCR/ABL 融合基因的表达明显受到抑制,且作用呈 Hemin 浓度依赖性。关键词:氯高铁血红素;K562 细胞;红系分化;BCR/ABL 融合基因ABSTRACTChanges and Significances of BCR/ABL Expression During Erythroid Differ...

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