高中生物必修二实验十一DNA的粗提取与鉴定

实验十一 DNA 的粗提取与鉴定教学目的初步掌握 DNA 粗提取和鉴定的方法。观察提取出来的 DNA 物质。实验原理DNA 在 NaCl 溶液中的溶解度是随 NaCl 的浓度变化而改变的。DNA 在 0．14mol/L 的 NaCl 溶液中的溶解度最低，据此可使溶解于 NaCl 溶液中的 DNA 析出。DNA 不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液，据此可提取杂质较少的 DNA。DNA＋二苯胺蓝色（用于 DNA 的鉴定）实验步骤1．材料制备ml 柠檬酸钠 100ml 500ml 烧杯→玻璃棒搅拌→1000r/min 离心 2min→吸去上清液→活鸡血 180ml 即得鸡血细胞液（也可将上述烧杯置于冰箱中，静置一天使鸡血细胞自行沉淀）2．方法步骤 取血细胞液 5-10ml＋20ml 蒸馏水，玻璃棒沿一个方向快速搅拌（1）提取血细胞核物质 纱布过滤，滤液中含 DNA 和其他核物质，如蛋白质 原理：血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破，玻璃棒快速搅拌机械加速血细胞破裂（2）溶解核内 DNA：滤液＋2mol/LNaCl 溶液 40ml，玻璃棒沿一个方向搅拌（3）析出含 DNA 的粘稠物：向上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向搅拌，出现丝状物，当丝状物不再增加时，停止加水（此时 NaCl 溶液相当于稀释到 0．14mol/L）（4）滤取含 DNA 的粘稠物：用多层纱布过滤，含 DNA 的粘稠物留在纱布上（5）DNA 粘稠物再溶解： 20ml2mol/LNaCl 溶液 50ml 烧杯， 上述粘稠物 缓慢搅拌 3 min（6）过滤含 DNA 的 2mol/LNaCl 溶液：用 2 层纱布过滤，滤液中含 DNA（7）提取含杂质较少的 DNA：上述溶液＋95%酒精，缓慢搅拌，出现乳白色丝状物，用玻璃棒将丝装物卷起。（8）DNA 鉴定：实验关键： 本实验成功的关键是猎取较纯净的 DNA，因此应注意：1．充分搅拌鸡血细胞液。DNA 存在于鸡血细胞核中。将鸡血细胞与蒸馏水混合以后，应用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞加速破裂，并释放出 DNA2．沉淀 DNA 必须用冷酒精。实验前必须准备好大量 95%的酒精，并在冰箱中（5℃以下）至少存放 24 小时。3．正确搅拌含有悬浮物的溶液。在第（3）、（5）步骤，玻璃棒不要直插烧杯底部，且搅拌要轻缓，以便获得较完整的 DNA 分子。在步骤（7），要将玻璃棒插入烧杯溶液中间，用手缓慢转动 5-10min。【同类题库】．在“ DNA 的粗提取与鉴定 ”的实验中分 别使用 2mol／L、0．14mol／L、2mol／L、0015mol／L 的氯化钠溶液，其作用分别是（A）A．溶解、析出、溶解、...