葡萄糖氧化酶活力测定(分光度法)1.原理(1))葡萄糖氧化酶的催化特性：葡萄糖氧化酶的每个酶分子中含有两单位 FAD(黄素腺嘌吟二核普酸)，作为受氢体催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生过 氧化氢。C 6H12O6+O2=氧化酶 C 6H12 07+H2° 2在一定时间内葡萄糖经氧化酶催化发生反应后，测定其反应液的过氧化氢浓度即 可算出葡萄糖氧化酶的活力。(2) )葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化产生的过氧化氢在一定 pH 值的缓冲溶液中 和加热条件下能使靛蓝胭脂红发生褪色反应，并且其反应速度在一定范围内和过 氧化氢浓度成正比，据此测定出产生的过氧化氢的量，进而计算出葡萄糖氧化酶 活力。(3))首先利用一系列浓度的过氧化氢标准溶液与靛蓝胭脂红反应，在 615nm 波 长处测定吸光度，建立标准曲线。然后，作葡萄糖氧化酶催化葡萄糖反应，再取其反应液与一定浓度的靛蓝胭脂红溶液反应随后测定其在 615nm 波长处测定吸光度，将吸光度值代入标准曲线方程后可推算出氧化酶活力。2 药品(1)) 0.2mol/L 葡萄糖溶液：称取 3.96g 一水葡萄糖定容于 1 . mL 冷藏 3 小时备用，2 天内有效。(2)1. 0 x10-3mol/L 靛蓝胭脂红溶液：称取 0.466g 靛蓝胭脂红定容于 10mL。(2)) 0.2M 醋酸-醋酸钠缓冲溶液(pH=5.2):称取 16.16g 三水醋酸钠及 2.48g冰醋酸定容至 10mL(4 ) 12mg/L 过氧化氢标准溶液：准确称取 0.040g 30%的过氧化氢溶液(过氧化氢需事先标定取实际值)定容于 10mL。3 实验方法(1))标准曲线的绘制准确吸取 0、1、2、3、4、5、6mL 过氧化氢标准溶液(12mg/L)，分别置于25mL 比色管中，加人 1.3mL 靛蓝胭脂红溶液(1.0x 10-3mol/L )和 3. 0mL 乙酸 一乙酸钠缓冲液，再加人蒸馏水稀释至 25mL 配成含有过氧化氢 0.mg/L、0.48mg/L、0.96 mg/L、1.44 mg/L、1.92 mg/L、2.40 mg/L、2.88 mg/L 的溶液，于沸 水浴中加热 13min 后，用流水冷却比色管 5min。用 1cm 比色皿，以蒸馏水作参比，在波长 615nm 处测定其吸光度，以吸光 度对过氧化氢浓度作图(分光度作横坐标，过氧化氢浓度为丛坐标)得标准曲线 方程。(2))按酶活大小称取适量葡萄糖氧化酶以醋酸-醋酸钠缓冲液稀释至约 6U/mL的浓度，某些酶产品水溶性很差，加稀释液混均定容好后需过滤取滤清夜测定。(3))将稀释好的酶液置于 37。。水浴中计时保温 5 分钟。(4))吸取 2.mL 葡萄糖溶液置于比色管中，将其放入 37。水浴中计时保温 5 分钟。(5)...
