层析填料CaptoMMC的使用说明VIP免费

CaptoMMC皇家药院CaptorMMC是一种耐盐的多模式的生物处理媒介，在使用填充床色谱法从大量的培养液中纯化蛋白质时可以作为捕获介质和中间纯化介质。CaptoMMC在提高生产力的同时降低了生产成本：在高电导率下具有很高的动态载量；高容量的吞吐量；新的选择性；更小的操作单元。1生物处理媒介生物处理媒介因为生产规模的色谱层析而得到发展。所有的生物处理媒介均经验证方法进行生产，并且经过测试以满足生产的需求。安全的订购和交付模式能够为规模生产需要的媒介提供可靠的供应。法规支持文件(RSF)可用来协助工艺验证和提交给监管机构。生物处理媒介可以覆盖从捕获到精纯的所有纯化步骤。2CaptoMMC的特性CaptoMMC具有多种官能团的配体，多种作用方式的官能团使配体具有不同于传统离子交换剂的选择性，且在高盐条件下仍具有结合蛋白质的活性。CaptoMMC与大分子间存在多种作用方式，其中最显著就是离子作用，氢键和疏水作用。CaptoMMC是为了提高介质在捕获和中间纯化步骤中的速度和通量而设计的。通过提高高盐浓度下的容量和低反压条件下的流速，而减短生产周期和提供生产力。该媒介以高流速的琼脂糖为基质，典型的大规模柱子(直径为1m，柱床高度为20cm)在顶板压力低于3bar时流速为600cm/h或者更高。高交联度的琼脂糖基质提供了很高的物理和化学稳定性。容量、洗脱行为和压力/流速等特性不受层析过程常用溶液的影响。CaptoMMC和琼脂糖6快速的压力-流速特性比较，工作条件3方法设计和优化设计和优化生物大分子分离方法的目的是确定实验条件，在尽可能短的时间和尽可能高的产品回收率的条件下提高目的分子的最大吸附量。在结合蛋白时，CaptoMMC的作用类似于弱阳离子交换剂。因为允许在高电导率条件下吸附蛋白，所以可能不需要为了提高填料的结合能力而去筛选最优化的加载电导率。然而加载电导率可能会影响吸附选择性。CaptoMMC在高电导率条件下对蛋白的有效捕获的特性在许多情况下会限制提高盐浓度以洗脱蛋白质的方法的使用。通常可以通过联合改变pH、缓冲液浓度和洗脱盐而摸索到最优的洗脱条件。为了建立最优的洗脱方案，实验设计是一种研究多种参数对蛋白回收率的影响的有效方法，实验设计方法的例子如应用说明11-0035-48所述，或者可以应用最优化的梯度洗脱方法。4建议的纯化方案使培养液的pH比目标蛋白的等电点低0.5~2.0个pH。需要根据具体的目标分子确定精确的pH。使用与培养液相同pH的起始缓冲液平衡柱子；上样；用起始缓冲液洗去未结合的样品；按照以下方式洗脱目标蛋白：4.1通过使用低于目标蛋白等电点0.5、1.5、2.5个pH的缓冲液或者使用pH梯度缓冲液筛选最优洗脱pH。如果需要可以将目标蛋白开始洗脱的pH作为基础进行优化。4.2在步骤1确定的pH条件下，使用0.5、1.0、1.5M的盐溶液筛选洗脱的盐浓度。4.3如果需要进一步优化，可以提高缓冲盐的浓度，如从50Mm~250mM。4.4如果目标蛋白仍然以级分的不对称峰洗脱，可以更换洗脱盐，如NaCl改为NH4CL。4.5尿素和有机修饰剂等添加剂某些蛋白的回收率。5通量的优化优化方案主要需要考虑产品回收率和吞吐量之间的关系。使用实际给料过程的前沿分析检测对目标蛋白的动态结合能力。由于在样本应用程序中，动态结合能力是流速的函数，突破能力必须通过各种不同的停留时间来定义（流速），以显示最佳的吞吐量水平。6放大在实验室规模的方法得到优化之后，可以按比例进行放大。6.1根据载量的需要选择柱床体积。6.2选择一个直径合适的柱子使柱床高度能达到10~45cm之间，为了充分利用CaptoMMC，在大规模生产时我们建议柱床的高度为20cm或更高。6.3在进行放大实验时，在增加柱子直径和体积流量的同时通常都会保持柱床高度和流速恒定。然而，在优化方案时会优先选择小的柱体积，这是为了节省样品和缓冲液，如优化动态结合能力等参数时会选择比最终高度更低的柱子高度。只要保留时间是恒定的，目标分子的结合能力就保持不变。其它的因素如关键杂质的清洗会随着柱床高度的改变而改变，需要在最终柱床高度进行验证。滞留时间近似等于柱床高度与流速的比值。7实验室规模柱子的填装以下是关于实验室规模柱子的填装的说明：10cm柱床高度的Tricorn5/100,Tri...