选修3现代生物技术专题一、基因工程1.（2018年11月）（二）（3）某小组应用基因工程方法开展适用于该生态工程的抗虫植物改良研究。为提高将重组DNA分子导入受体细胞的效率，除考虑导入方法、筛选条件、防止污染外，还需考虑的主要因素有（答出2点即可）。农杆菌介导法是目前植物转基因的常用方法，该方法的基本过程是农杆菌感染植物时，并将其插入到受体细胞的基因组中。欲获得稳定遗传的抗虫性强的转基因植物品种，则转入的抗虫基因必须能在受体细胞中。答案:重组DNA的质量和浓度、受体细胞的生长状态与密度携带目的基因的Ti质粒转移到受体细胞稳定和高效地表达2.（2016年4月）（二）兔肝细胞中的基因E编码代谢甲醛的酶，拟利用基因工程技术将基因E转入矮牵牛中，以提高矮牵牛对甲醛的代谢能力，请回答：（1）从兔肝细胞中提取mRNA，在_________________酶的作用下形成互补DNA，然后以此DNA为模板扩增得到基因E。在相关酶的作用下，将基因E与Ti质粒连接在一起，形成_____________，再导入用氯化钙处理的_________，侵染矮牵牛叶片。将被侵染的叶片除菌后进行培养，最终得到转基因矮牵牛。其中培养过程正确的是______A.叶片在含适宜浓度生长素的培养基上分化形成愈伤组织B.愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽C.再生的芽在细胞分裂素含量较高的培养基上生根D.愈伤组织在含适宜浓度植物生长调节剂的培养基上脱分化形成再生植株（2）取转基因矮牵牛叶片，放入含MS液体培养基和适宜浓度甲醛且密封的试管中。将试管置于___________上，进行液体悬浮培养。一段时间后测定培养基中甲醛的含量，以判断基因E是否在转基因矮牵牛中正常表达。培养过程中液体培养基的作用：一是提供营养；二是___________________________，从而使叶片保持正常的形态。答案：（1）逆转录重组DNA分子农杆菌B（2）摇床维持渗透压3.(2015年10月）科研人员拟将已知的花色基因(目的基因)转入矮牵牛的核基因组中，培育新花色的矮牵牛。请回答:（1）为了获得大量的目的基因，将其与含有抗生素抗性基因的质粒DNA形成重组DNA,再与经(A.氯化钙B.氯化钠C.蔗糖D.葡萄糖)处理的大肠杆菌液混合，使重组DNA进入大肠杆菌。用的玻璃刮刀将稀释后的大肠杆菌液接种到含有抗生素的固体培养基上，经培养形成，再进行鉴定和扩大培养。（2）从扩大培养的大肠杆菌中提取含有目的基因的DNA，用分别切割含目的基因的DNA和农杆菌的Ti质粒，然后用DNA连接酶连接，形成重组DNA并导入农杆菌。（3）取田间矮牵牛的幼嫩叶片，经自来水冲洗，先用70%浸泡，再用5%次氯酸钠浸泡，最后用清洗，作为转基因的受体材料。（4）将消毒后的矮牵牛叶片剪成小片，在含有目的基因的农杆菌溶液中浸泡后，取出并转移至加有适当配比生长调节剂的MS培养基(含蔗糖、琼脂和抗生素，下同)上，使叶小片先脱分化形成。再将其转移至另一培养基诱导形成芽，芽切割后转移至(A.LB培养基B.MS培养基+适宜浓度NAAC.MS培养基+适宜浓度BAD.NAA/BA小于1的MS培养基)上生根，形成完整植株。（5）取出试管苗，在适宜的光照、温度和80%以上的等条件下进行炼苗。提取叶片组织的DNA，采用PCR技术目的基因，鉴定目的基因是否成功导入。（6）为判断本研究是否达到预期目的，可比较转基因植株和非转基因植株的性状。答案：（1）A灭菌涂布菌落（2）限制性核酸内切酶（3）酒精无菌水（4）愈伤组织B（5）湿度扩增（6）花色二、克隆工程1.（2020年1月）（二）某小组欲进行烟草原生质体分离与培养的研究，请回答：（1）为了获取某植物叶片无菌的原生质体，先将叶片经表面消毒并去除下表皮再将其置于经处理的较高渗透压的混合酶液中。酶解后，经多次离心获得原生质体。然后测定该原生质体的活性，可采用的方法有(答出2点即可)。。（2）若要获得已知序列的抗病基因，可采用或PCR的方法。为了提高目的基因和质粒重组的成功率，选择使用，对含目的基因的DNA片段进行处理，使其两端形成不同的粘性末端，对质粒也进行相同的处理，然后用DNA连接酶连接形成重组质粒。通过在大肠杆菌中，以获得大量的重组质粒，最终将其导入原生质体中。（3）原生质体在培养过程中，只有重新形成后...
