中药化学试验指导—试验五穿心莲内酯的提取分离与检识VIP专享VIP免费

实验五穿心莲内酯的提取分离与检识（一）目的要求学习中药中内酯类成分的提取分离及检识，通过实验要求：1．掌握从穿心莲中提取、分离穿心莲内酯的操作方法。2．学习穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成物的制备。3．熟悉穿心莲内酯类成分的性质和检识方法。4．了解去除叶绿素的方法。（二）、主要化学成分的结构及性质穿心莲为爵床科植物穿心莲Andrographispaniculata(Burm.f.)Nees的全草。穿心莲中含有多种二萜类化合物，主要为穿心莲内酯、新穿心莲内酯、脱氧穿心莲内酯等。1．穿心莲内酯(andrographolide)又称穿心莲乙素。分子式C20H30O5，分子量350.44。无色方形或长方形结晶，味极苦。mp.230～231℃，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶中，微溶于氯仿、乙醚、难溶于水、石油醚、苯。2．新穿心莲内酯(neoandrographolide)又称穿心莲丙素、穿心莲新苷。分子式C26H40O8，分子量480.58。无色柱状结晶，无苦味。mp.167～168℃，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶中，微溶于水，较难溶于苯、乙醚、氯仿及石油醚。3．去氧穿心莲内酯(deoxyandrographolide)又称穿心莲甲素。分子式C20H30O4，分子量334.44。无色片状（丙酮、乙醇或氯仿）或无色针状结晶（醋酸乙酯），味稍苦。mp.174～175℃，［α］-40°（C=1,无水乙醇）。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶、氯仿，可溶于乙醚、苯中，微溶于水。4．脱水穿心莲内酯(dehydroandrographolide)分子式C20H28O4,分子量332.42。无色针状结晶（30％或50％乙醇），mp.204℃。易溶于乙醇、丙酮，可溶于氯仿，微溶于苯，几不溶于水。1522.5DO1316OOOOHO201011OOOCH2HO1817CH2HOCH2OHCH2HOHCH2OHCH2OH19glcOCH2穿心莲内酯去氧穿心莲内酯新穿心莲内酯脱水穿心莲内酯（三）实验原理本实验是利用穿心莲内酯类成分易溶于甲醇、乙醇、丙酮等溶剂的性质，选用乙醇为提取溶剂进行提取。穿心莲中含有大量叶绿素，故用活性炭吸附，除去叶绿素等脂溶性杂质。又根据穿心莲内酯与去氧穿心莲内酯在氯仿中溶解度不同而进行分离。也可利用穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯及新穿心莲内酯结构上的差异所表现的极性不同，用氧化铝柱色谱分离。（四）实验内容1．提取方法Ⅰ：略方法Ⅱ：略2．精制略3．分离略4．穿心莲内酯类成分的检识（1）异羟肟酸铁反应取穿心莲内酯结晶数毫克，加乙醇1ml溶解，加7％盐酸羟胺甲醇溶液2～3滴，加10％氢氧化钾甲醇溶液1～2滴使呈碱性，于水浴上加热2分钟，放冷后，加稀盐酸使呈酸性，加1％三氯化铁溶液1～2滴，混匀，呈紫红色。（2）Legal反应取穿心莲内酯结晶少许，加乙醇1ml溶解，加0.3％亚硝酰铁氰化钠溶液2～4滴，加10％氢氧化钠溶液1～2滴，呈紫色。（3）Kedde反应取穿心莲内酯结晶少许，加乙醇1ml溶解，加碱性3,5-二硝基苯甲酸试剂2滴，呈紫色。（4）穿心莲内酯类成分的薄层色谱检识薄层板：硅胶G-CMC-Na试样：自制穿心莲内酯乙醇溶液对照品：穿心莲内酯对照品乙醇溶液展开剂：①氯仿-甲醇（9∶1）②氯仿-正丁醇-甲醇（2∶1∶2）显色剂：喷雾Kedde试剂，加热显色（五）实验说明及注意事项1．穿心莲内酯类化合物为二萜类内酯，性质极不稳定，易氧化、聚合而树脂化。因此提取所用的穿心莲应是当年产的新药材，并且要未受潮变质的茎叶部分，否则内酯含量明显下降至极低，难以提取得到。2．提取时，如用热乙醇加热回流提取穿心莲总内酯，能同时提出大量穿心莲中的叶绿素、树脂以及无机盐等杂质。使析晶和精制较为困难，因此本实验用冷浸法和超声波振荡法提取。3．以超声波振荡法提取省时，浓缩析晶时脂溶性杂质少，易得到黄色结晶，得率高。4．穿心莲内酯的析晶宜在含乙醇量稍高的情况下进行，此时晶形与结晶的纯度都较好。当溶液的含水量较高，或粘稠度太大时，往往不易析出结晶。（六）思考与练习1．叶绿素除用活性炭吸附法去除外，还可采用哪些方法去除？2．穿心莲总内酯的分离可采用哪些方法？试比较各种方法的优缺点。3．根据穿心莲内酯类成分的结构，试判断其极性的强弱，在进行吸附薄层色谱时其Rf值大小如何？4．Legal反应和Kedde反应的机理是什么？什么样的结构才有阳性反应？