高考总复习物质的提取、分离和鉴定专题编稿：宋辰霞审稿：闫敏敏【考纲要求】1．掌握细胞中一些化合物的鉴定原理及方法2．简述绿叶中色素提取和分离的实验过程，掌握实验注意事项3．解释DNA粗提取的方法及DNA鉴定原理4.简述蛋白质的提取和分离技术5.简述植物精油的提取过程【考点梳理】考点一、物质的提取、分离和鉴定的一般流程和方法【高清课堂：物质的提取分离和鉴定专题411404物质的提取、分离和鉴定实验流程及方法】考点二、绿叶中色素的提取和分离1.实验原理：（1）提取原理：光合色素能溶解在有机溶剂无水乙醇中，可用无水乙醇来提取色素。（2）分离原理：用纸层析法分离，不同的色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的色素随层析液在滤纸上的扩散速度快，溶解度低的色素扩散速度慢，这样，在扩散的过程不同的色素会分离开。2.实验材料：新鲜的绿色叶片（如菠菜的绿叶）注意：一定要选取新鲜、浓绿的植物叶片，这样的叶片光合色素含量高。3.实验流程及结果①色素的提取→②制备滤纸条→③画滤液细线→④纸层析法分离色素→⑤观察并记录结果层析前的准备及层析橙黄色胡萝卜素（最窄）叶黄素黄色叶绿素a蓝绿色要点诠释：滤液细线（1）色素的提取和分离——十个“为什么”：①为什么色素提取时加丙酮或无水乙醇?（色素溶于有机溶剂）②为什么加二氧化硅?(使研磨充分)正常情况下获得的色素提取液应为深绿色③为什么加CaCO3?（防止叶绿素受到破坏）④为什么滤纸要剪去两角?（使分离出的色素带整齐）⑤为什么滤液细线画的越细越齐越好?（使分离出的色素带整齐）⑥为什么不要让层析液没及滤液细线?（因为含有色素的滤液溶于层析液中不能形成色素带）⑦为什么纸层析时要用培养皿等盖上烧杯?（防止层析液中的丙酮挥发）⑧为什么色素会在滤纸条上分离开?（不同色素的溶解度不同，在滤纸条上的扩散速度不同）⑨为什么滤纸条要避光保存?（色素见光分解）叶绿素b黄绿色⑩为什么试验后洗手?（接触了层析液等有毒的化学药品）（2）色素带在滤纸上排列的先后顺序巧记：胡、黄、a、b（3）色素带宽窄：叶绿素a最宽，胡萝卜素最窄【高清课堂：物质的提取分离和鉴定专题411404DNA粗提取和鉴定实验】考点三、DNA的粗提取和鉴定1.实验材料：最好选取DNA含量高、易破碎且无颜色干扰的生物组织2.实验原理：（1）破碎细胞：①动物细胞的破碎动物细胞在低浓度溶液（蒸馏水）中吸水涨破，同时，搅拌的机械作用可加速动物细胞的破裂（包括细胞膜和核膜的破裂），于是DNA被释放出来，但它们往往与蛋白质结合在一起。②植物细胞的破碎在切碎的植物组织中加入一定量的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨。加入洗涤剂可以瓦解细胞膜，从而释放出DNA，加入食盐能够使DNA溶解且可使DNA与蛋白质分离。（2）去除杂质，初步提纯：DNA或蛋白质等在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，0.14mol/L时，DNA的溶解度最小，可通过控制NaCL溶液的浓度来去除杂质。可先向得到的滤液中加入NaCL,调整NaCL的浓度为DNA溶解度较高时（2mol/L）中，溶解DNA，再加入蒸馏水，将NaCl溶液调整NaCL的浓度为DNA溶解度最低时（0.14mol/L），使DNA析出。补充知识，了解即可：去除杂质还可选择其它方法：一：直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10～15分钟，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。二：将滤液放在60℃～75℃的恒温水浴箱中保温10～15分钟（此温度下蛋白质变性析出，DNA不受影响），注意严格控制温度范围。（3）进一步提纯：DNA不溶于酒精溶液，但细胞内的某些蛋白质则溶于酒精，可向DNA溶液中加入冷酒精，使DNA析出。（4）鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色3.实验过程，如下图：（1）破碎细胞，获得含DNA的滤液（破碎动物细胞及植物细胞的原理与方法不同）（2）去除滤液中的杂质，进行初步提纯[在滤液中加入NaCl，使其浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质→再加入蒸馏水，调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA后，过滤→再用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA并过滤]注意：析出含DNA的黏稠物时，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓地慢慢地加入，不能一次快速加入，否则会影响实验结果。（3）用冷酒精使DNA析出，进一步提纯95%冷酒精含D...
