实验五实验五链球菌及肠球菌的鉴定链球菌及肠球菌的鉴定目的要求：目的要求：1.1.掌握链球菌属及肠球菌属的分离掌握链球菌属及肠球菌属的分离培养与鉴定方法。培养与鉴定方法。2.2.掌握链球菌及链球菌的菌落特点、掌握链球菌及链球菌的菌落特点、菌体形态及染色性。菌体形态及染色性。步骤与方法步骤与方法11、观察菌落、观察菌落将菌株接种于血琼脂平板将菌株接种于血琼脂平板上，上，35℃35℃孵育孵育18-24h18-24h后观察菌落，记录后观察菌落，记录菌落大小、形态、表面、边缘、透明及颜菌落大小、形态、表面、边缘、透明及颜色、有无溶血及特点。将肺炎链球菌继续色、有无溶血及特点。将肺炎链球菌继续孵育孵育2-32-3天看菌落中心有无凹陷呈天看菌落中心有无凹陷呈““脐脐状状””。。链球菌的溶血性β溶血性链球菌22、形态观察、形态观察涂片、革兰氏染色镜检，记录涂片、革兰氏染色镜检，记录镜下细菌染色性、大小、形态、排列镜下细菌染色性、大小、形态、排列及荚膜。及荚膜。肺炎链球菌肺炎链球菌S.S.pneumoniaepneumoniae形态与染色：G+球菌,矛头状,成双排列，宽端相对，尖端向外,有荚膜肺炎链球菌革兰染色有荚膜肺炎链球菌荚膜染色特点肺炎链球菌肺炎链球菌S.pneumoniaeS.pneumoniae培养特性：培养特性：营养营养要求高，兼性厌氧。要求高，兼性厌氧。初次分离需提供初次分离需提供5%-5%-10%10%的的COCO22。。18-24h后血平板上形成灰白色、圆形、针尖样的菌落。菌落周围有草绿色溶血环。肺炎链球菌肺炎链球菌S.pneumoniaeS.pneumoniae培养特性：培养48h后，菌落有自溶现象，菌落的中心会出现凹陷，像“肚脐”称脐状凹陷。肺炎链球菌肺炎链球菌S.pneumoniaeS.pneumoniae主要生化反应主要生化反应optochinoptochin试验试验::含含55μgμgoptochinoptochin纸片贴纸片贴于涂布有待测菌的于涂布有待测菌的平板上平板上35℃35℃孵育孵育过夜，抑菌圈大于过夜，抑菌圈大于14mm14mm即为敏感。即为敏感。甲型溶血链球菌(R)肺炎链球菌(S)胆汁溶菌试验胆汁溶菌试验原理：胆汁或胆盐能活化肺炎链球菌原理：胆汁或胆盐能活化肺炎链球菌的自溶酶，促进细菌细胞膜破损或菌体裂解的自溶酶，促进细菌细胞膜破损或菌体裂解而自溶。而自溶。方法：方法：AA、平板法：在血琼脂平板上选、平板法：在血琼脂平板上选择出待检的草绿色溶血的菌落，观察记录菌择出待检的草绿色溶血的菌落，观察记录菌落特点，然后于菌落上加一滴去氧胆酸钠溶落特点，然后于菌落上加一滴去氧胆酸钠溶液，液，35℃35℃孵育孵育15-30min15-30min观察结果。观察结果。BB、试管法：将甲型链球菌和肺炎链球菌、试管法：将甲型链球菌和肺炎链球菌血清肉汤培养液血清肉汤培养液1ml1ml分别加入分别加入22支试管，支试管，再于各管中加入去氧胆酸钠溶液再于各管中加入去氧胆酸钠溶液0.1ml0.1ml，，摇匀后置于摇匀后置于37℃37℃水浴水浴30min30min后观察结果。后观察结果。结果判断：平板法若菌落消失为阳结果判断：平板法若菌落消失为阳性，不消失为阴性，试管法若液体由浑浊性，不消失为阴性，试管法若液体由浑浊变透明为阳性，不透明为阴性，此试验是变透明为阳性，不透明为阴性，此试验是鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌的重鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌的重要试验，后者阳性。要试验，后者阳性。痰标本肺炎链球菌革兰染色A群(化脓性)链球菌生物学性状球形或椭圆形，链状排列，革兰染色阳性(G＋)，无芽胞，无鞭毛，透明质酸的荚膜。1.形态与染色化脓性链球菌A群(化脓性)链球菌生物学性状营养要求高：血平板或含血清培养基；液体培养为沉淀生长；血平板呈灰白色表面光滑小菌落，不同菌株溶血不一，多数有透明溶血环(溶血现象)。2.培养特性杆菌肽敏感试验杆菌肽敏感试验原理：原理：AA群化脓性链球菌对杆菌肽群化脓性链球菌对杆菌肽几乎几乎100%100%敏感，而其他链球菌对杆菌肽敏感，而其他链球菌对杆菌肽通常耐药。通常耐药。方法：挑取被检菌落，密涂于血琼方法：挑取被检菌落，密涂于血琼脂平板上，将杆菌肽纸片（脂平板上，将杆菌肽纸片（0.04U/0.04U/片）贴片）贴于平板上，于平板上，35℃35℃孵育...
