实验三实验三糖化糖化酶活力酶活力的测定的测定指导老师：孙运军指导老师：孙运军研究生：赵渊徐妙研究生：赵渊徐妙一、目的和内容一、目的和内容目的：学习测定糖化酶活力的原理并掌握目的：学习测定糖化酶活力的原理并掌握测定糖化酶活力的方法测定糖化酶活力的方法内容：１内容：１..学习糖化酶活力的原理．学习糖化酶活力的原理．２２..测定并计算糖化酶活力．测定并计算糖化酶活力．二、糖化酶简介以及其活性的测定原理二、糖化酶简介以及其活性的测定原理①①糖化酶的应用及生产糖化酶的应用及生产②②糖化酶的催化原理糖化酶的催化原理③③酶活测定方法酶活测定方法①①糖化酶的应用与生产糖化酶的应用与生产糖化酶，全名葡萄糖淀粉酶（糖化酶，全名葡萄糖淀粉酶（GlucoamylaseEC.3.2.1.GlucoamylaseEC.3.2.1.33），又名淀粉葡萄糖苷（），又名淀粉葡萄糖苷（AmyloglucosidaseAmyloglucosidase）或）或γ-γ-淀淀粉酶（粉酶（γ-amylaseγ-amylase），），是一种含有甘露糖、葡萄糖、半乳糖和糖醛酸的糖蛋白，分子量在60～1000kDa之间。因发酵工业中大量用作淀粉糖化剂，习惯上简称糖因发酵工业中大量用作淀粉糖化剂，习惯上简称糖化酶。化酶。糖化酶在工业生产中的应用：糖化酶在工业生产中的应用：糖化酶是淀粉糖化发酵生产酒精和葡萄糖浆的主糖化酶是淀粉糖化发酵生产酒精和葡萄糖浆的主要酶类。特别是酿酒酵母利用淀粉原料发酵时，淀要酶类。特别是酿酒酵母利用淀粉原料发酵时，淀粉液化后的糖化作用是必不可少的工序，因为大多粉液化后的糖化作用是必不可少的工序，因为大多数酿酒酵母只能利用可发酵的糖进行酒精发酵。数酿酒酵母只能利用可发酵的糖进行酒精发酵。糖化酶不仅用于酒类、酒精生产和葡萄糖浆的制糖化酶不仅用于酒类、酒精生产和葡萄糖浆的制取，还广泛地用于抗生素、氨基酸、有机酸的生产。取，还广泛地用于抗生素、氨基酸、有机酸的生产。糖化酶是我国产量最大、应用最广的酶制剂之一。糖化酶是我国产量最大、应用最广的酶制剂之一。目前，工业中广泛使用黑曲霉目前，工业中广泛使用黑曲霉((AspergillusnigerAspergillusniger))、泡盛曲、泡盛曲霉霉((AspergillusawamoriAspergillusawamori))、米根霉、米根霉((RhizopusoryzaeRhizopusoryzae))和臭曲和臭曲霉霉((AspergillusfoetidusAspergillusfoetidus))为生产菌株来发酵生产糖化酶。为生产菌株来发酵生产糖化酶。今天的实验用酶就是利用黑曲霉变异菌株进行液体深层通风今天的实验用酶就是利用黑曲霉变异菌株进行液体深层通风发酵后提取获得。发酵后提取获得。②②糖化酶的作用机制糖化酶的作用机制糖化酶是由一系列微生物分泌的具有外切酶活性的胞外酶。糖化酶的主要作用是从淀粉、糊精、糖原等碳链上的非还原性末端（整个碳链只有一个还原端，与之相对的都是非还原端）依次水解a-1,4糖苷键,切下一个个葡萄糖单元，并像β-淀粉酶一样,使水解下来的葡萄糖发生构型变化，形成β-D-葡萄糖。对于支链淀粉，当遇到分支点时，它也可以水解a-1,6糖苷键，由此将支链淀粉全部水解成葡萄糖。糖化酶也能微弱水解a-1,3连接的碳链，但水解a-1,4糖苷键的速度最快，它一般都能将淀粉百分之百地水解生成葡萄糖。还原还原端端③③酶活测定方法酶活测定方法测定糖化酶的方法有次碘测定糖化酶的方法有次碘酸钠法、兰酸钠法、兰––爱农法（ＳＰ法）、爱农法（ＳＰ法）、SchoorlSchoorl法（ＤＵ法）和对硝基苯酚葡萄糖法（ＮＰ法（ＤＵ法）和对硝基苯酚葡萄糖法（ＮＰＧ法）Ｇ法）、、3,5-3,5-二硝基水杨酸二硝基水杨酸(DNS)(DNS)等方法。等方法。本试验测定糖化酶活力采用次碘酸钠法。本试验测定糖化酶活力采用次碘酸钠法。糖化酶以可溶性淀粉为底物在一定条件下糖化酶以可溶性淀粉为底物在一定条件下（（pHpH范围是范围是44～～6,6,温度范围是温度范围是4040～～6060℃℃）进行反）进行反应应，生成的葡萄糖用次碘酸钠法，生成的葡萄糖用次碘酸钠法定量测定。以单位时间内分解定量测定。以单位时间内分解α–α–１，４糖１，４糖苷键生成葡萄糖所需的酶量为酶的活力单位。苷键生成葡萄糖所需的酶...
