还原糖的定量还原糖的定量--3,5---3,5-二硝基水杨酸比色法二硝基水杨酸比色法一、目的一、目的1.1.掌握还原糖和总糖测定的基本原理，掌握还原糖和总糖测定的基本原理，2.2.学习比色法测定还原糖的操作方法和分光学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。光度计的使用。二、原理二、原理还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性还原原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。（还原糖以葡萄糖含量计）。还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-3,5-二硝基水二硝基水杨酸则被还原为棕红色的杨酸则被还原为棕红色的3-3-氨基氨基-5--5-硝基水杨酸。硝基水杨酸。·在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。·由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。三、实验材料、主要仪器和试剂三、实验材料、主要仪器和试剂11．实验材料．实验材料小麦面粉。小麦面粉。22．主要仪器．主要仪器（（11）比色管：）比色管：25mL25mL（（22）大离心管：）大离心管：50mL×250mL×2（（33）烧杯：）烧杯：100mL100mL（（44）三角瓶：）三角瓶：100mL100mL（（55）容量瓶：）容量瓶：100mL100mL（（66）刻度吸管：）刻度吸管：1mL1mL；；2mL2mL；；10mL10mL（（77）恒温水浴锅）恒温水浴锅（（88）离心机）离心机（（99）电子天平）电子天平（（1010）分光光度计）分光光度计33．试剂．试剂（（11））1mg/mL1mg/mL葡萄糖标准液葡萄糖标准液准确称取准确称取80℃80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg100mg，置于小烧杯中，，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL100mL容量瓶中，用蒸馏水定容容量瓶中，用蒸馏水定容100mL100mL，，混匀，混匀，4℃4℃冰箱中保存备用。冰箱中保存备用。（（22））3,5-3,5-二硝基水杨酸（二硝基水杨酸（DNSDNS）试剂）试剂将将6.3gDNS6.3gDNS和和262mL2MNaOH262mL2MNaOH溶液，加到溶液，加到500mL500mL含有含有185g185g酒酒石酸钾钠的热水溶液中，再加石酸钾钠的热水溶液中，再加5g5g结晶酚和结晶酚和5g5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至后加蒸馏水定容至1000mL1000mL，贮于棕色瓶中备用。，贮于棕色瓶中备用。四、操作步骤1．制作葡萄糖标准曲线葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂摇匀,沸水浴加热5min反应液冷却至室温蒸馏水定容至25mL(混匀)540nm下测光密度值绘出标准曲线表表11葡萄糖标准曲线制作葡萄糖标准曲线制作管号管号1mg/mL1mg/mL葡萄糖标准液葡萄糖标准液（（mLmL））蒸馏水蒸馏水（（mLmL））DNSDNS（（mLmL））葡萄糖含量葡萄糖含量（（mgmg））光密度值光密度值（（ODOD540nm540nm））0000221.51.5000.0000.000110.20.21.81.81.51.50.20.20.0530.053220.40.41.61.61.51.50.40.40.1460.146330.60.61.41.41.51.50.60.60.2570.257440.80.81.21.21.51.50.80.80.3620.362551.01.01.01.01.51.51.01.00.4660.466661.21.20.80.81.51.51.21.20.5550.5552．样品中还原糖的测定（1）还原糖的提取3.00g食用面粉放...
