层析介质的品质评价1耐压&流速1.1介质的耐压介质耐压是介质性能的一个方面，耐压由介质的材质，交联方式决定，与使用过程没有关系。某一个特定的介质其耐压是固定的。最大耐压是介质的外观形态、内部孔径结构不得改变的临界点。耐反压是描述介质在一定条件下使用过程中的一个状态，不仅与介质的耐压有关，与使用时的流速，柱床高度，缓冲液成分都有一定的关系。介质的流速是根据介质使用过程中反压的变化测定的，当反压等于介质的耐压时此时这种特定条件测定的流速即为介质的最大流速。我们在使用的过程监测的都是介质的耐反压，耐反应与多方面因素有关，通常柱床高度越高反压越大，介质的粒径越小装填后反压越大，层析缓冲液的粘度越大反压越大，所以我们在使用过程中检测反压通常不得超过介质耐压的三分之一。1.2常用介质的耐压a■硅胶材质的介质耐压大于lOMPa，属于高压介质。b.聚苯乙烯材质的介质耐压在0.5MPa，属中压介质。c■琼脂糖材质的介质，如GE公司的Sepharose4FF和6FF系列和SepharoseXL系列，及汇研生物Focurose4FF和6FF系列及FocuroseXL系列介质的耐压小于0.3MPa.d•高刚性琼脂糖介质，如GE公司的Capto及汇研生物的FocuroseHF/HPR系列的层析介质的耐压在0.5MPa，此类介质是生物大分子纯化介质发展的趋势，其多糖材质使其具有良好的亲水性及生物相容性，两种多糖的交联互补也是其具有较大的刚性，在传质速率，流速方面优势明显。1.3介质的流速介质的流速指在给定的条件下，如给定压力，给定柱床高度，给定缓冲液类型测的数值，不同方法测定的流速不一样。a.同一材质的介质，粒径越小流速越小。b.同一材质的介质，装填高度越高流速越小。2.选择性&分辨率基质：空心网状结构，具有理化情性间隔臂：克服空间位阻效应，改善配基与目标物的结合2.1介质的选择性了解介质的选择性先从介质的结构开始，除凝胶过滤介质是要靠填料的孔和微球之间的间隙去分配不同物质的，离子，亲和，疏水三种吸附层析介质都有一定的选择性，其选择性是由介质结构中的配基决定的。一个介质的配基确定后，其可识别的分子或基团就确定了，介质的选择性顾名思义也就是其识别能力。介质的选择性是介质的一个特征，选择性由其配基决定，亲和的选择性最高，大多亲和介质都趋于一对一的精准识别，疏水介质的分辨率也很高，离子交换介质识别带一类电荷的物质，相比亲和选择性就要差一些。不同类型的介质选择性和适用性有差异，选择性通常是和适用性融合起来的，一种介质能识别某种物质，那么这个物质就适用此介质来纯化。2.2介质的分辨率介质的分辨率是介质分离物质的能力描述，这与多方面因素有关。a.介质的粒径越小，装柱后理论塔板数越高，分辨率也越高。如GE公司的SepharoseFF系列介质及汇研生物FocurFF系列介质的分辨率就要比GE公司的SepharoseHP系列，及汇研生物FocuroseHP系列介质的分辨率小，也因此HP系列的介质称为高分辨率介质。b.在一定范围内，介质的结合载量的提高会导致其分辨率下降。c.介质装填时，随装填高度的增加分辨率也增加，但是反压也增大。d.层析缓冲液也会影响介质的分辨率，比如离子交换介质使用时，用2MNaCI直接洗脱，此时就失去了分辨带不同电荷物质的能力。e.层析过程的控制也会影响介质的分辨率，比如流速，通常流速增大分辨率降低。f.介质的保养及清洗也会影响介质的分辨率，使用后要及时对介质进行CIP，避免沉积在介质中的杂质影响分离过程，导致介质的分辨率下降。3.粒径分布3.1粒径对介质品质的影响：a.同一材质的介质，粒径越小装柱后有更高的理论塔板数，所以粒径越小分辨率越高。b.同一材质的介质，粒径越小同样体积的介质比表面积越大，所以载量越高。c.同一材质的介质，粒径越小装柱后反压越大，流速越小。d.同一材质的介质，粒径越小理论塔板数越高，其回收率也随粒径的变小而增大。这可能与分辨率越高，在收集时开始收集状态更好把控有关。e.同一材质的介质，粒径分布的越均一或分布区间越小,装填后理论塔板数就越高，分辨率就越高。粒径一致的介质称为单分散介质，其分辨率最高，当然粒径分布对填料的影响同时遵循粒径大小对介质性能的影响，如单分散为60um的介...
