课题课题22土壤中分解尿素的土壤中分解尿素的细菌的分离与计数细菌的分离与计数【学习目标】1.研究培养基对微生物的选择作用2.进行微生物数量的测定3.分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性【重点难点】课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制课题难点:对分解尿素的细菌的计数【实验原理】利用选择培养基,对特定微生物的选择作用一、课题背景一、课题背景11、尿素的利用、尿素的利用尿素尿素是一种重要的是一种重要的农业氮肥。农业氮肥。尿素尿素不能直接不能直接被农被农作物作物吸收。吸收。土壤中的细菌将尿素土壤中的细菌将尿素分解成氨分解成氨之后才之后才能被植物利用。能被植物利用。22、细菌能利用尿素的原因、细菌能利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶能合成脲酶CO(NHCO(NH22))22脲酶脲酶+H+H22OO+CO+CO222NH2NH3333、常见的分解尿素的微生物、常见的分解尿素的微生物芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。也能分解尿素。44、课题目的、课题目的①①从土壤中分离出从土壤中分离出能够分解尿素的细菌能够分解尿素的细菌②②统计统计每克土壤每克土壤样品中究竟含有样品中究竟含有多少这样的细菌多少这样的细菌一一..研究思路研究思路㈠㈠..筛选菌株筛选菌株㈡㈡..统计菌落数目统计菌落数目㈢㈢..设置对照设置对照11、实例：、实例：启示：启示：寻找寻找目的菌种目的菌种时要根据它对生存环境的要时要根据它对生存环境的要求，到求，到相应的环境相应的环境中去寻找。中去寻找。原因：原因：因为热泉温度因为热泉温度7070～～808000CC，淘汰了绝大，淘汰了绝大多数微生物只有多数微生物只有TaqTaq细菌被筛选出来。细菌被筛选出来。PCRPCR技术技术DNADNA多聚酶多聚酶链式反应链式反应是一种在是一种在体外体外将少量将少量DNADNA大量复制大量复制(PCR)(PCR)的技术，此项技的技术，此项技术要求使用术要求使用耐高温耐高温（（939300CC）的）的DNADNA聚合聚合酶。酶。㈠㈠..筛选菌株筛选菌株要分离一种微生物，必须根据该微生物的要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，特点，包括营养、生理、生长条件等；如：包括营养、生理、生长条件等；如：不同不同的微生物，的微生物，所需营养物质所需营养物质有较大差别，要针对微有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。生物的具体情况分析。方法：方法：⑴抑制大多数微生物的生长⑴抑制大多数微生物的生长⑵⑵促进促进目的菌株目的菌株的的生长生长结果：结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。等方法对它进行纯化培养分离。22、实验室中微生物的筛选原理：、实验室中微生物的筛选原理：人为提供有利于人为提供有利于目的菌株目的菌株生长的条件生长的条件((包括营养、包括营养、温度、温度、pHpH等等))，同时，同时该条件抑制或阻止该条件抑制或阻止其他微生其他微生物生长。物生长。15.0g15.0g琼脂琼脂1.0g1.0g尿素尿素10.0g10.0g葡萄糖葡萄糖0.2g0.2gMgSOMgSO4`4`7H7H22OO2.1g2.1gNaHNaH22POPO441.4g1.4gKHKH22POPO4433、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：养基：①①从从物理性质物理性质看此培养基属于哪类？看此培养基属于哪类？固体培养基固体培养基②②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：碳源：葡萄糖葡萄糖氮源：氮源：尿素尿素培养基的培养基的氮源为尿素氮源为尿素，只，只有能合成有能合成脲酶脲酶的微生物才的微生物才能分解尿素，以尿素作为能分解尿素，以尿素作为氮源。氮源。缺乏缺乏脲酶的微生物脲酶的微生物由于不能分解尿素，由于不能分解尿素，缺乏缺乏氮源氮源而不能生长发育繁殖，而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿养基就能够选择出分解尿素的...
