课题2-土壤中分解尿素的细菌的分离与计数-(2)VIP专享VIP免费

课题课题22土壤中分解尿素的细菌的土壤中分解尿素的细菌的分离与计数分离与计数一、课题背景一、课题背景11、尿素的利用、尿素的利用尿素尿素是一种重要的是一种重要的农业氮肥。农业氮肥。尿素尿素不能直不能直接接被农作物被农作物吸收。吸收。土壤中的细菌将尿素土壤中的细菌将尿素分解成氨分解成氨之后才能被植物利用。之后才能被植物利用。22、细菌利用尿素的原因、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶能合成脲酶1.从土壤中分离出能够分解尿素的细菌能够分解尿素的细菌2.统计每克土壤每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌多少这样的细菌课题目的二二..研究思路研究思路㈠㈠..筛选菌株筛选菌株((分离分离出能够分解尿素的细菌）出能够分解尿素的细菌）㈡㈡..统计菌落数目统计菌落数目㈢㈢..设置对照（排除实验中非测试因素对结设置对照（排除实验中非测试因素对结果的影响）果的影响）11、实例：、实例：启示：启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。要求，到相应的环境中去寻找。原因：因为热泉温度原因：因为热泉温度7070～～808000CC，淘汰了绝大多，淘汰了绝大多数微生物，只有数微生物，只有TaqTaq细菌被筛选出来。细菌被筛选出来。DNADNA多聚酶链式反应多聚酶链式反应是是一种在体外将一种在体外将少量少量DNADNA大量复制大量复制的技术，此项的技术，此项技术要求使用技术要求使用耐高温耐高温（（939300CC）的）的DNADNA聚合聚合酶。酶。㈠㈠..筛选菌株筛选菌株美国黄石国家公园的热泉要筛选分离出一种菌株，必须根据该菌的特点，包括营养、生理、生长条件等，配制合适的培养基。方法：（1）抑制大多数微生物生长（2）造就有利于该菌生长的环境结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板法等方法对它进行纯化培养分离。2、实验室中微生物的筛选原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。培养基添加培养基添加尿素尿素，只有能合成，只有能合成脲酶脲酶的微生物的微生物才能分解尿素，才能分解尿素，以尿素作为氮源以尿素作为氮源。。缺乏缺乏脲酶脲酶的微生物由于不能分解尿素，的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不缺乏氮源而不能生长发育繁殖能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。养基就能够选择出分解尿素的微生物。44、筛选分解尿素的微生物、筛选分解尿素的微生物15.0g15.0g琼脂琼脂1.0g1.0g尿素尿素10.0g10.0g葡萄糖葡萄糖0.2g0.2gMgSOMgSO4`4`7H7H22OO2.1g2.1gNaHNaH22POPO441.4g1.4gKHKH22POPO4455、、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：①①从物理性质看此培养基属于哪类？从用途上从物理性质看此培养基属于哪类？从用途上属于哪类培养基？属于哪类培养基？固体培养基固体培养基②②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：碳源：葡萄糖、尿素葡萄糖、尿素氮源：氮源：尿素尿素选择培养基11、显微镜直接计数：、显微镜直接计数：㈡㈡..统计菌落数目：统计菌落数目：不能区分死菌与活菌；不能区分死菌与活菌；个体小的细菌在显微镜下难以观察；个体小的细菌在显微镜下难以观察；缺点缺点2.2.间接计数法（间接计数法（活菌计数法）活菌计数法）（（11）常用方法：稀释涂布平板法。）常用方法：稀释涂布平板法。（（22）原理：在稀释度足够高时，微生物在）原理：在稀释度足够高时，微生物在固固体培养基体培养基上所形成的上所形成的一个菌落，来源于一个菌落，来源于样品稀样品稀释液中的释液中的一个活菌一个活菌，即，即11个菌落→个菌落→11个活菌个活菌每克样品中的菌落数＝每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M(C÷V)×M其中，其中，CC：平均菌落数，：平均菌落数，VV：涂布平板时所用的体积：涂布平板时所用的体积(ml)(ml)，，MM：稀释倍数。：稀释倍数。注意事项注意事项①①一般选择菌落数在一般...