课题2-土壤中分解尿素的细菌的分离与计数-(3)VIP专享VIP免费

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥尿素不能直接被农作物吸收，只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用。土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶。CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3尿素颗粒尿素分子的立体结构脲酶一、研究思路（一）筛选菌株根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。为什么Taq细菌能从泉中被筛选出来呢？热泉70-80℃的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而使耐热的Taq细菌脱颖而出。自然界中目的菌株筛选的依据：【选择培养基】允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。实验室中微生物的筛选原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。下面是本课题将用到的培养基配方，请根据下表回答下面的问题。将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL(1)在该培养基的配方中，为微生物提供碳源的是________，提供氮源的是________。(2)绝大多数微生物都能利用________，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解________。(3)分析该培养基的配方，该培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，又是如何进行选择的？_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。具有。以尿素为唯一氮源的培养基可以分离到产生脲酶的微生物【分析培养基】（二）统计菌落数目1．活体计数法（稀释涂布平板法）（1）操作方法：稀释涂布平板→统计菌落数（2）原理：在稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。即1个菌落→1个活菌。（3）【统计原则】：①选30300∼个菌落的平板统计；②每个稀释度取3个平板，取其平均值；（4）【结果】统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。2．显微镜直接计数法：这种方法是利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。缺点是不能区分死菌和活菌。两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果：A同学涂布了一个平板，统计的菌落数为230；B同学涂布了三个平板，统计的菌落数分别为21、212和256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认为哪位同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？•第一位同学没有设置重复组，因此结果不具有说服力。•第二位同学考虑到设置重复实验组的问题，但其中一个平板的计数结果与另外2个相差太远，说明在操作过程中出现了错误，因此不能简单地将3个平板的计数值，来求平均值【三、设置对照】1．设置对照的目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。2．对照实验：是指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。满足该条件的称为对照组，未满足该条件的称为实验组。启示：在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在做“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中，小张同学在没有设置对照的情况下，从对应倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落。但是，其他同学在同样的稀释度下只筛选出大约50个菌落。经过大家的讨论，认为小张同学和其他同学的实验结果不同的主要原因可能有：①培养基被杂菌污染了；②培养基中混入了除尿素以外含氮物质，导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基上生长；③所选用的土壤样品不同。你能通过设置对照，帮助小张同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？•原因分析：培养基污染或操作失误•方案一：其他同学用与小张同学一样的土样进行实验，结果与小张同学一致，则证明小张无误；结果不同，则证明小张同学的操作或培养基的配置有问题。•方案二：将小张同学制备的培养基在不加土样的情况下进行培养，...