课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、筛选菌株的思路1.自然界中目的菌株的筛选：(1)依据：根据它对_________的要求，到相应的环境中去寻找。(2)实例：PCR技术过程中用到的耐高温的______________，就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中分离出来的。生存环境TaqDNA聚合酶2.实验室中目的菌株的筛选:(1)原理：人为提供有利于_________生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。(2)方法：利用___________分离。①选择培养基：在微生物学中，将允许_____种类的微生物生长，同时_____或_____其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。②选择分解尿素的细菌的培养基特点：_____是唯一氮源，按物理性质归类为___________。目的菌株选择培养基特定抑制阻止尿素固体培养基二、统计菌落数目的方法和注意事项1.常用方法：稀释涂布平板法。(1)统计依据：①当样品的_______足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个_____。②通过统计平板上的_______来推测样品中大约含有的活菌数。稀释度活菌菌落数(2)计算公式：每克样品中的菌株数=__________。C：代表某一稀释度下平板上生长的___________。V：代表涂布平板时所用的稀释液的_____。M：代表_________。(3)注意事项：①一般选择菌落数在________的平板进行计数。②统计的菌落数往往比活菌的实际数目___。③统计结果一般用_______而不是用_______来表示。④设置对照：主要目的是排除实验组中___________对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。(C÷V)×M平均菌落数体积稀释倍数30～300低菌落数活菌数非测试因素2.其他方法利用_______直接计数滤膜法显微镜三、实验设计1.土壤取样：(1)取样原因：土壤有“___________________”之称。同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量_____，种类_____。(2)土壤要求：富含_______，pH接近_____且潮湿。(3)取样部位：距地表约___________的土壤层。微生物的天然培养基最大最多有机质3cm～8cm中性2.样品稀释：(1)稀释原因：样品的_________直接影响平板上生长的__________。(2)稀释标准：选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证获得菌落数在________之间，便于计数。(3)稀释倍数：①测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养。②测定放线菌的数量，一般选用_____________倍稀释。③测定真菌的数量，一般选用_____________倍稀释。稀释程度菌落数目30～300103、104和105102、103和1043.微生物的培养与观察：(1)培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养_____和培养_____。(2)观察：每隔_____统计一次_____数目，最后选取菌落数目_____时的记录作为结果。4.细菌的计数：当菌落数目稳定时，取同一_______下的3个平板进行计数，求出_______，并根据所对应的_______计算出样品中细菌的数目。温度时间24h菌落稳定稀释度平均值稀释度四、操作提示1.无菌操作：(1)取土样的用具在使用前都需要_____。(2)应在_____旁称取土壤，并在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好_____。(3)在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在_____旁操作。2.做好标记：本实验使用的平板和试管比较多。为避免混淆，最好使用前就做好_____。灭菌火焰棉塞火焰标记3.制定计划：对于耗时较长的生物实验，要事先_________，以便提高工作效率。4.菌种鉴定：细菌合成的_____将尿素分解成___，使培养基的碱性_____。在以_____为唯一氮源的培养基中加入_____指示剂，培养某种细菌后，若指示剂变___，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。制定计划脲酶氨增强尿素酚红红【思考辨析】1.判断正误(1)选择分解尿素的细菌的培养基为液体培养基。()【分析】选择分解尿素的细菌的培养基为固体培养基，固体培养基具有分离、鉴定作用。(2)统计菌落数目时为保证结果准确，一般选择菌落数目最多的平板进行统计。()【分析】统计菌落数目时为保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行统计。××(3)统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际数目。()【分析】由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。(4)...
