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实验七、果胶酶VIP免费

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实验七特定产物工业生产菌种发酵及应用性质研究一、实验目的•掌握菌种选育、菌种发酵条件的优化和微生物酶制剂酶活测定的基本方法;•了解酶学性质的研究.•了解影响果胶酶对果汁澄清效果的各种因素二、设备与材料(一)培养基1、菌种筛选使用2、黑曲霉Asp-2固体发酵用(二)试剂1、酶活测定用试剂和DNS2、新鲜果汁(三)仪器⑴基本培养基:果胶1%,磷酸氢二钠0.5%,蛋白胨1%,pH4.5,琼脂2.0%。⑵分离培养基果胶0.5%,磷酸氢二钠0.5%,琼脂2.0%,pH4.51、菌种筛选使用培养基(3)发酵培养基果胶1%,磷酸氢二钠0.5%,蛋白胨1%,pH4.5。菌种斜面培养基(查氏培养基)NaNO30.2%K2HPO40.1%KCl0.05%MgSO40.05%FeSO40.001%蔗糖3%琼脂2.5%自然pH2、黑曲霉Asp-2固体发酵培养基•种子培养基麸皮3.0%,橘子粉2.0%,硫酸铵0.5%,葡萄糖1%,KH2PO40.1%pH4.5•固体发酵培养基:5瓶/组麸皮10g,橘子粉2.5g,(NH4)SO40.1g(0.8%干料计)葡萄糖0.125g(1%干料计),水15ml按组统一配制后分装三角瓶先将(NH4)SO4、葡萄糖用水溶解,再加其它。要求:(三)仪器•烧杯、三角瓶、试管、移液管、洗耳球、量筒、容量瓶、试剂瓶、研钵等;•天平、灭菌锅、超净工作台、培养箱、电炉、恒温水浴锅、记时器(精确到秒)、分光光度计等。三、理论依据1、果胶酶概况2、果胶酶的酶活测定方法3、微生物发酵生产特定产物受培养基成分、培养条件和附加条件等的制约4、酶催化反应的进行受多种因素的影响•果胶质:是高等植物细胞壁内及细胞壁间的结构性多糖,是一类高分子碳水化合物,它的存在往往给果蔬加工等工艺带来许多麻烦和损失。•果胶酶:是指能分解果胶质的多种酶的总称,广泛存在于高等植物和微生物中。•产生果胶酶的微生物:细菌、放线菌、酵母和霉菌,但目前商品果胶酶多数来自霉菌。•果胶酶的应用:主要是用于果胶的分解,在水果加工、葡萄酒生产、麻类脱胶和饲料等方面有着广泛的应用。1、果胶酶概况•粘度降低法:利用粘度计测量在一定温度、酶浓度和一定反应时间内,标准果胶溶液的粘度降低值。•脱胶作用时间法:以脱胶作用的时间来测定果胶酶的酶活力。•次亚碘酸法:用滴定法定量测定半乳糖醛酸的生成量,以表示果胶酶的活力。•还原糖法(DNS法):测定在一定温度、酶浓度和一定反应时间内,水解果胶产生的还原糖的量。2、果胶酶的酶活测定方法•培养基成分:C源、N源、无机盐、水和生长因子•培养条件:温度、pH、溶解氧等•附加条件:诱导物、表面活性剂等3、微生物发酵生产产品受以下条件制约:4、酶催化反应的进行受多种因素的影响•底物浓度•酶浓度•温度•pH•激活剂•抑制剂四、实验方法步骤(一)固体发酵果胶酶(二)应用发酵制备的酶液进行果汁澄清的应用实验1、菌种准备2、氮源的选择和选择的氮源添加量对产酶的影响(第一组)3、碳源的选择和选择的碳源添加量对产酶的影响(第二组)4、培养基含水量对产酶的影响(第三组)5、接种量对产酶的影响(第三组)6、发酵时间对产酶的影响(第四组)7、发酵温度对产酶的影响(第五组)8、果胶酶酶活的测定9、仪器的使用注意事项:实验准备发酵时间发酵时间60h60h烘干烘干研磨研磨(一)固体发酵果胶酶1、菌种准备•菌种活化:试管保存菌种→斜面活化→30℃培养约60h•液体培养:将菌种接种入装有50mL种子培养基的250mL三角瓶内,30℃,200rpm,培养约40h,备用。2、氮源的选择和选择的氮源添加量对产酶的影响•选择硫酸铵、蛋白胨、牛肉膏按照1%浓度替换发酵培养基中的蛋白胨,接种5%液体种子,培养48小时,测定酶活。•在发酵培养基中分别添加0.5%、1.0%、1.5%、2.0%和2.5%(按干料计)浓度的已选择的氮源,保持培养基的其它成分不变,在相同接种量(约5%,即1.5ml)相同培养条件下(30℃,60h)发酵,测定酶活。3、碳源的选择和选择的碳源添加量对产酶的影响•选择果胶、葡萄糖、橘子粉按照1%浓度替换发酵培养基中的蛋白胨,接种5%液体种子,培养48小时,测定酶活。•在液体发酵培养基中分别添加0、0.5%、1.0、2%、3.%的选择的碳源,保持培养基的其它成分不变,在相同条件下接种液体种子(约5%,即1.5ml),相同培养条件下,30℃,发酵6...

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