动物细胞培养动物细胞融合生产单克隆抗体动物细胞核移植动物细胞工程常用技术其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础动物细胞培养概念:动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。1、动物细胞培养过程动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液胰蛋白酶10代细胞原代培养50代细胞传代培养细胞株无限传代细胞系单个细胞加培养液遗传物质未改变遗传物质已改变动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质,将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。(水解弹性纤维)1.动物细胞的培养过程幼龄动物取动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础思考讨论:在动物细胞培养过程中,为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理?胰蛋白酶处理动物组织,可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解,获得单个细胞。有关概念:原代培养:指将要培养的动物细胞取出后,先用胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞,然后配制成一定浓度的细胞悬浮液,再将该悬浮液放入培养瓶中培养。传代培养:将原代细胞从培养瓶中取出,配制成细胞悬浮液,分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养,称为传代培养。细胞株:原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞,大部分细胞衰老死亡,少数细胞存活到40~50代,这种传代细胞为细胞株。细胞系:细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态,只有部分细胞由于遗传物质的改变,使其在培养条件下可以无限制传代,这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别:细胞系的遗传物质改变,具有癌细胞的特点,失去接触抑制,容易传代培养。细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代原代培养传代培养细胞株细胞系如何界定原代培养和传代培养;细胞株和细胞系?多数组织细胞必须在固定的表面上生长和分裂。随细胞增多,细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变贴壁生长细胞分裂生长到相互接触时就停止分裂增殖的现象叫接触抑制2.动物细胞培养条件:1、无菌、无毒的环境(添加一定量的抗生素,定期更换培养液)2、营养(葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。)3、温度和PH36.5+(-)0.5度,7.2-7.44、气体环境:O2和CO2(95%空气和5%CO2)保证细胞顺利的生长增殖3.动物细胞培养技术的应用1.蛋白质生物制品的生产如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体2.健康细胞培养培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植3.细胞的生理、药理、病理研究思考:2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料?1、动物细胞培养液的主要成分是什么?较植物组培培养基有何独特之处?3、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体?主要成分:葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有:①液体培养基②成分中有动物血清等因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛,分裂能力强不能,动物细胞培养只能使细胞数目增多,不能发育成新的动物个体动物细胞培养液的主要成分:葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。与植物培养基相比其特点是:(1)液体培养基(2)含有动物血清动物体细胞大都生活在液体的环境比较项目植物组织培养动物细胞培养原理培养基性质培养基特有成分培养结果培养目的细胞的全能性细胞增殖植物组织培养和动物细胞培养的比较固体培养基液体培养基蔗糖植物激素葡萄糖动物血清植物体细胞株、细胞系快速繁殖、培育无病毒植株获得细胞或细胞分泌蛋白既然动物体细胞核仍具有全能性,为什么不能直接利用动物体细胞培育动物体?利用动物体细胞核移植技术动物细胞的全能性会随着动物细胞分化程度的提高而逐渐受到限制,分化潜能逐渐变弱。怎样才能使动物体细胞表现出全能性呢?