细菌总数的测定（1）培养计数法一、目的1.掌握从微生物群体中土壤和饲料等）获得纯种微生物的分离和培养技术。2.掌握无菌操作技术。二、材料和器皿1. 天平、取样工具、涂布棒(接种棒 )。2. 无菌三角瓶、试管、培养皿、移液管、玻璃珠。3. 无菌水。4. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。三、实验操作步骤1、取样将待测样品充分混匀，取少量，备用。2、 倒平板熔化已灭菌的上述4 种培养基并冷却至45oC 左右倒平板，凝固待用，每种培养基每个稀释度各三只平板。3、编号取 5 支无菌空试管（15×150mm）依次编号为10-3、 10-4、10-5、 10-6、10-7。4、分装无菌水按无菌操作用5mL 移液管分别吸取4.5mL 无菌水于编号的各无菌空试管中。5. 制备土壤稀释液称土样 1g 于盛有 99mL 无菌水或无菌生理盐水并装有玻璃珠的三角瓶中，振荡10～20min，使土样中的菌体、芽孢或孢子均匀分散，此即为10-2 浓度的菌悬液。用无菌移液管吸取悬液0.5mL 于 4.5mL 无菌水试管中，用移液管吹吸三次、摇匀，此即为10-3 浓度。同样方法，依次稀释到10- 7。稀释过程需在无菌室或无菌操作条件下进行。环境要求：琼脂平板在工作台暴露15 分钟，每个平板不得超过15 个菌落。代表性：取固体样品时需多采几个部位，且经过均质或研磨；液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。减少误差：每递增稀释一次即换用1 支 1ml 灭菌吸管，将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，并且稀释液应充分振摇。6、培养及计数计数时间：到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0－4℃，但不得超过24h。计平皿中菌落数：肉眼观察，必要时用放大镜检查。记下各平板的菌落总数，求出同稀释度的各平板平均菌落数。规律：不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比（同一稀释度的二个平板的菌落数应基本接近），即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。如出现逆反现象，则应视为检验中的差错（有的食品有时可能出现逆反现象，如酸性饮料等），不应作为检样计数报告的依据。 当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计， 如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。如有片状菌落生长，该平板一般不宜采用，如片状菌落不到平板一半，而另一半又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2 代表全平板的菌落数；当计数平板内的菌落数过多（即所...
