水中总大肠菌群的测定—多管发酵法一．原理总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。多管发酵法的原理是根据大肠菌群能发酵乳糖、 产酸、产气，以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢， 呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验求得水样中的总大肠菌群数。试验结果以最可能数 ( most probable numbe), 简称 MPN 表示。三．仪器(1) 高压蒸气灭菌器。(2) 恒温培养箱、冰箱。(3) 生物显微镜、载玻片。(4) 酒精灯、3mm 接种环。(5) 培养皿 ( 直径 100mm ) 、试管 ( 5 x150mm ), 吸管 ( 1、5、10mL ) 、 烧杯( 200、500、2000mL ) 、锥形瓶 ( 500、1000mL ) 、采样瓶、移液枪。四．培养基及染色剂的制备1. 乳糖蛋白胨培养液：将10g 蛋白胨、 3g 牛肉膏、 5g 乳糖和 5g 氯化钠加热溶解于1000mL 蒸馏水中，调节溶液pH 为 7.2? 7.4, 再 加入 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL , 充分混匀，分装于试管中，于121C 高压灭菌器中灭菌 15min ，贮存于冷暗处备用。2. 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。除蒸馏水外 , 各组份用量增加至三倍。3．伊红美蓝培养基：① 贮备培养基的制备：于2000mL 烧杯中，先将 20g 琼脂加到 900mL 蒸馏水中，加热溶解。再加2.0g 邻酸二氢钾及10g 蛋白胨，混合使之溶解，用蒸馏水补充至1000mL, 调节溶液 pH 值为 7.2? 7.4。 趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入10g 乳糖，混匀后定量分装于250mL 或 500mL 锥形瓶内，于 121C 高压灭菌 15min , 贮于冷暗处备用。② 平皿培养基的制备：将上述制备的贮备培养基融化。根据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例分别吸取一定量已灭菌的2% 伊红水溶液（ 0.4g 伊红溶于20mL 水中）和一定量已灭菌的0.5% 美 蓝水溶液（ 0.065g 美蓝溶于13mL 水中），加入已融化的贮备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡），立即将此培养基适量倾入已灭菌的空平皿内，待冷却凝固后，置于冰箱内备用。4．革兰氏染色剂：① 结晶紫染色液：将20mL 结晶紫乙醇饱和溶液（称取4? 8g 结 晶紫溶于 100mL95% 乙醇中）和 80mL 1% 草酸铵溶液混合、过滤。该溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。② 助染剂：将 1g 碘与 2g 碘化钾混合后， 加入少许蒸馏水， 充分 振荡，待完全溶解后，用蒸馏水补充至300mL 。此溶液两周内有效。当溶液由棕黄色变为淡黄色时应弃去。为易于贮备，可将上述碘与...
