脂肪鉴定脂类细胞化学试验报告

脂类细胞化学（苏丹Ⅲ染色法 ）1.实验目的：用苏丹Ⅲ染液对小鼠的肠系膜细胞染色，观察细胞颜色，掌握苏丹 Ⅲ染液的染色方法。2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管（2）实验药品：蒸馏水、甲醛钙溶液、70%乙醇水溶液、苏丹Ⅲ染液（3）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）由脂肪酸和醇作用生成的酯及其衍生物统称为脂类，这是一类一般不溶于水而溶于脂溶性溶剂的化合物。脂类是机体内的一类有机大分子物质，它包括范围很广，大体上可以分为类脂和油脂两大类。类脂包括磷脂(phospholipids)，糖脂 (glycolipid)和胆固醇及其酯(cholesterol and cholesterol ester)三类。而油脂可以分为常温下常温液态的油和常温下固态的脂肪两类。这几种脂类化学结构有很大差异，生理功能各不相同。其共同物理性质是不溶于水而溶于有机溶剂，在水中可相互聚集形成内部疏水的聚集体。（2）在固定细胞时，通常使用脂溶性固定液。然而，鉴定的材料是脂肪时，脂溶性的固定液会溶解脂肪，致使把切片放到显微镜下观察时，观察不到被染色的脂肪，只能看到脂肪细胞中有很大的空洞。最好的固定材料是甲醛类的固定液。如医学上保存尸体采用的是福尔马林，即40%的甲醛水溶液，本次实验采用的则是甲醛钙溶液。（3）光学显微镜的切片多是石蜡切片。在熔接石蜡时，需要用到脂溶性溶剂，而脂溶性溶剂会溶解细胞中的脂肪，因此本次实验不可采用石蜡切片。但是锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等有机溶剂，可以采用石蜡切片。（4）制作切片有多种方法，如冰冻切片、 明胶包埋冰冻切片、本次实验采用的是操作简单的铺片法。（5）脂类染色的原理是，染料溶于脂类显色。选择溶剂时应注意，溶剂必须既溶解的染料，又不溶解掉脂类。4.实验步骤：（1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。剪开腹腔，用镊子提起小肠，使盖玻片紧贴于肠系膜。用剪子将连同盖玻片和其上粘的肠系膜剪下，反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上，固定15 分钟 ,（2）吸蒸馏水滴于载玻片、载玻片之间冲洗，用滴管不断吸取液体以去除固定液。（3）用 70%的乙醇水溶液代替蒸馏水重复上一步骤，进行冲洗。（4）用苏丹 Ⅲ染液染色30mins。（5）染色结束时，用吸水纸吸去多余染液。擦净盖玻片周边及表面，用显微镜观察。5.实验结果：脂肪细胞被苏丹Ⅲ染液染成橘红色。细胞周围有溢出的脂肪粒，呈圆形，橘红色。10*4 显微镜下观察：10*10 显微镜下观察：10*40 显微...