1/6课题 3 血红蛋白的提取和分离【课题目标】1.通过进行探究实验，结合观看实验视频，能够尝试从血液中提取和分离血红蛋白2.通过阅读资料，结合教师讲解，能够了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理【课题重点与难点】课题重点：凝胶色谱法的原理和方法。课题难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。【导学诱思】思考 1：分离生物大分子的基本思路是什么？思考 2：蛋白质的分离和提取的原理是什么？思考 3：高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？思考 4：人们用鸡的红细胞提取 DNA，用人的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？一、基础知识：（一）凝胶色谱法（分配色谱法）：1、概念：根据被分离蛋白质的，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来分离蛋白质的有效方法。2、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程，移动速度，而的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度，相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。3、具体过程：1）2）（3）（4）（5）2/63/6冲液。思考：说出人体血液中缓冲对？思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？三）电泳：下，这些基团会带。在电场的作下，这些带电分子会向着与移动。电泳利用了分离样品中各种分以及分子本1）2）（3）（4）（5）4/6带电性质、分子大小和形使分子迁移速1、概念：指发生迁移的过程。2、原理：许多重要的生物大分子，如等都具有不同使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。3、分类：[-① 电泳I② 电泳。测定（蛋白质相对分子质量）通常用十二烷基硫酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入。SDS 能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在 SDS 的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是。SDS 能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS 复合物，SDS 所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于二、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定分子向阳极移动缓冲液凝胶电泳原理示意图阳琼力口入待分离的样品状的不同阴极溶旨亠5/61.样品处理（1）红细胞的洗涤① 目的：去除② 方法：离...
