a淀粉酶高产菌株筛选实验

1 a -淀粉酶高产菌株的分离鉴定及固定化 枯草芽孢杆菌是革兰氏阳性细菌，是a-淀粉酶高产菌株之一，其菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，在遗传学研究中应用广泛。其芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。广泛生长在中性的的含淀粉多的环境中，如富含淀粉的面粉厂、土壤等。 淀粉酶是一种用途极为广泛的生物催化剂，可应用于面包制作业、淀粉的糖化和液化、纺织品脱浆、造纸、清洁剂工业、化学、临床医学的分析和制药业等。淀粉酶家族包括α - 淀粉酶、β - 淀粉酶和葡萄糖淀粉酶。α -淀粉酶为内切酶，以无规则的方式切开淀粉分子内部的α - 1，4 糖苷键，而使淀粉生成糊精和低聚糖，是一种钙离子依赖性酶。β - 淀粉酶从非还原性末端顺次切下麦芽糖，为外切酶。葡萄糖淀粉酶是一种作用于α - 1，4 糖苷键的外切酶，从非还原糖末端切下葡萄糖分子。 a-淀粉酶是一种胞外酶，由于酶纯化等操作往往导致酶活性和稳定性都受影响，而利用细胞固定化可以很好的解决这一问题，其中α -淀粉酶的固定化交联法是目前比较理想的方法。另可尝试探索用一定浓度的凝胶包埋枯草芽孢菌或用吸附法、交联法将枯草芽孢杆菌固定化，使菌体不能流动而酶可以存在反应液里。凝胶柱底部可选用一定大小的半透膜使酶和淀粉不能流出反应凝胶柱，而产物可以流出。 【实验一】 一、a -淀粉酶生产菌种的分离与培养、筛选 二、【实验原理】 大多数枯草芽孢杆菌好氧，最适生长温度为 32℃,PH 为 7.2，转速为 140r/min，接种量为 9％，芽孢率生长最适温度 36℃，最适 PH 为 7.2，最适转速 120r/min。在以淀粉为碳源的固体培养基上用划线法分离纯化出产a-淀粉酶的菌株，根据是否可产生透明圈来筛选。透明圈越大，产酶能力越强。 三、【实验仪器和材料】 1、试剂：0.1%吕氏(Loeffier)美蓝染液 配制方法：A 液：美蓝(methy lene blu e, 又名甲烯蓝)0.3 g, 95%乙醇30 ml； B 液：0.0l% KOH l00ml。 混合A 液和B 液即成，根据需要可配制成稀释美蓝液。 2、淀粉酶筛选富集培养液（细菌） 淀粉10 g、硫酸铵10 g、氯化钠5 g、硫酸亚铁0.5 g、磷酸氢二钾1 g、牛肉膏1 g，定容1 L，调至 pH 为 7，取 300ml分装 9 ml 于小试管中，高...